根癌农杆菌介导玉米自交系A188愈伤组织再生条件优化.docVIP

根癌农杆菌介导玉米自交系A188愈伤组织再生条件优化 　　摘 要：以A188玉米自交系的愈伤组织为材料，研究了影响农杆菌介导玉米转化和再生的各种因素，建立了该自交系的遗传转化体系。结果表明，10～15 mm的幼胚最易诱导出胚性愈伤组织；在侵染液和共培养基中加入乙酰丁香酮能显著提高转化效率；合适的菌液浓度（OD600=04）、共培养时间（3 d）、共培养温度（24℃）有利于提高转化效率。 　　关键词：玉米；根癌农杆菌；愈伤组织；再生体系 　　中图分类号：S513.01 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2012）12-0028-04 　　Optimization of Conditions for Agrobacterium tumefciens-Mediated 　　Transformation and Regeneration of Maize Inbred Line A188 Callus 　　Qiu PingPing1， Xin XiangQi2， Liu WenHao1， Su WenMin1， Zhu XiaoPing1* 　　（1.College of Plant Protection， Shandong Agricultural University， Taian 271018， China； 　　2.Institute of Plant Protection， Shandong Academy of Agricultural Sciences， Jinan 250100， China） 　　Abstract The factors affecting the Agrobacterium tumefciens-mediated transformation and regeneration of maize （Zea mays L.） embryogenic callus were optimized， and the genetic transformation system was established for the maize inbred line A188. The results indicated that 1.0～1.5 mm immature embryos were easier to induce embryogenic callus； the addition of acetosyringone in infection solution and common medium could increase the transformation efficiency significantly； appropriate bacterial concentration （OD600=0.4）， incubation time （3 days） and co-culture temperature （24℃） were benefit to increasing formation efficiency. 　　Key words Maize； Agrobacterium tumefciens； Callus； Regeneration system 　　农杆菌介导法以其操作简单、低成本、转基因拷贝数较低的优点在植物遗传转化研究中得到了广泛应用，尤其是在双子叶植物遗传转化中取得了显著效果[1，2]。单子叶植物不是农杆菌的天然宿主，不易通过农杆菌进行遗传转化。但是一些研究表明农杆菌也可以转化单子叶植物玉米，并初步建立了农杆菌介导的转化体系[3，4]。 　　1975年，Green和Phillips利用玉米幼胚成功诱导出植株以来，利用玉米幼胚在不同培养基上诱导愈伤组织并再生出植株的成功研究颇多[5～7]，并证明幼胚是玉米诱导愈伤组织并再生植株的理想材料[8，9]。本试验拟针对玉米自交系A188幼胚进行愈伤组织诱导和再生体系优化，以期建立高效表达的农杆菌介导的转化体系。 　　1 材料与方法 　　11 材料 　　111 菌株和质粒 根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）菌株LBA4404和大肠杆菌（Escherichia coli）菌株DH5α均由本实验室保存；带有Bar选择标记基因、Ubiquitin启动子和PGIP目的基因（辣椒多聚半乳糖醛酸酶可逆性抑制蛋白）的双元植物表达载体pCBUPGIP由本研究室构建。 　　112 植物材料及培养基 玉米自交系A188由本实验室保存，玉米幼胚取自田间生长的玉米植株。 　　组培过程中的培养基除了生根培养基用MS作为基本培养基外，其他均使用N6培养基作为基本培养基。各培养基成分详见表1。