棉兰染色张健东课件.pptx

真菌真菌镜检染色- 乳酸棉兰酚染色 天津市第三中心医院检验科 张健东真菌标本的接种培养基选择常用染色方法曲霉菌属镜下形态和菌落特点病例分析医学重要的霉菌分类合格痰标本分类细胞数/低倍视野WBC扁平上皮细胞5251042510-25中华检验医学杂志,2000,23(5):312含1-2种不同细菌，可考虑继续培养，结果可根据病情再作分析超过3种细菌，按不合格标本处理。真菌标本的接种呼吸道标本,肺泡灌洗液三区划线28℃孵箱，5天培养基用封口膜密封好怀疑生长缓慢菌（如组织胞浆菌），延长培养时间至30天。怀疑真菌生长，点种无菌体液： （脑脊液、穿刺液、骨髓、玻璃体等）无菌体液1-5ml打入真菌/分枝杆菌血培养瓶真菌培养宜使用含和不含抗菌药物的两类培养基。经空气传播有高度感染性的真菌样品、含菌丝体的真菌应在生物安全柜内处理。若采用平皿培养，应封盖。CNAS-CL42：2012 培养基选择CHROMagar念珠菌显色培养基沙保罗培养基SDA马铃薯培养基PDA真菌培养物形态学鉴定菌落形态（菌落大小、形态、色素、颜色和质地）显微镜下真菌孢子、菌丝、产孢等特征性结构进行初步判断真菌种属。遇到疑难的丝状真菌，应请专业组内多名技术人员观看、讨论，以确定种属。每次观察的菌落特征均需要记录、并照下显微镜下的形态特征和菌落。参考图谱或网上咨询形态学鉴定菌落形态 观察酵母型菌落类酵母型菌落丝状型菌落（正、反）双相真菌显微镜检查有隔或无隔分支或不分支有色或无色常见显微镜检查方法KOH压片法（直接镜检）墨汁染色乳酸酚棉兰染色六胺银染色革兰染色： 回顾性看有利于诊断显微镜检查方法KOH压片：皮屑、毛发、指甲、脓液、痰等标本置于载玻片上，加一滴10-20% KOH，盖上盖玻片镜检，加热30-60s，镜检先低倍后高倍（在KOH中加入刚果红1:1，更有利于真菌检测）显微镜检查方法墨汁染色：以无菌吸管吸取处理过的标本一滴置于玻片上，再加上一小滴印度墨汁混合均匀，以40°角盖上盖玻片(避免产生气泡)镜检（样本与墨汁等量混合）显微镜检查方法乳酸酚棉兰染色：通常采用透明胶带法利用胶带先粘一定量菌丝再粘在预先滴加乳酸酚棉兰的载玻片上显微镜下观察孢子和菌丝的形态、特征、大小和排列等。显微镜检查方法六胺银染色涂片（痰需消化，无菌液体离心）甲醇固定后自然风干过碘酸滴染10分钟，溶液用后弃去流水冲洗（3遍）65℃银溶染液1h-1.5h染色时间根据涂片的厚度所怀疑真菌的种类，通常念珠菌染色1h即可，疑为曲霉或者其他丝状真菌须适当延长染色时间（银溶液需现用现配，只用一次）流水冲洗（3遍）0.25%的氯化金染1到2分钟（可重复使用）流水冲洗3%的硫代硫酸钠染1分钟流水冲洗0.1%的亮绿染色30秒到1分钟 目的使得到一个背景色 菌体的包囊壁呈黑色曲霉菌镜下形态特点菌丝体形态曲霉菌丝有隔膜，为多细胞霉菌。分枝 （ 45℃角）有分枝足细胞分生孢子梗顶端膨大成为顶囊，一般呈球形。烟曲霉菌落特点培养特性：生长快45℃仍可生长开始为白色2-3日后转为蓝绿色背面无色或黄褐色表面粉末状烟曲霉菌落, PDA, 25℃, 7d镜下形态分生孢子头短粗型，梗光滑，4/5小梗覆盖，倒立烧瓶状顶囊，顶囊有单层小梗小分生孢子呈球形，绿色，有小刺镜下形态足细胞顶囊鉴别要点45℃生长良好，菌落呈蓝绿色顶囊呈烧瓶状，小梗为单层，与双层的土曲霉，杂色曲霉，构巢曲霉相区别顶囊单层和双层两种瓶梗的黄曲霉和黑曲霉鉴别，蓝绿色可与绿曲霉和棒曲霉鉴别形态学观察 ? 黄曲霉菌落特征 －生长快 －孢子黄色 －表面粉末状黑曲霉菌落特征生长快 PDA培养基菌落初为白色继而黑色背面无色或中央略褐色厚绒状气生菌丝多镜下形态分生孢子头疏松放射状，梗无色，小梗为单层，双层，或单双层同时生于一个顶囊，成放射状小分生孢子呈球形或梨形，表面粗糙镜下形态分生孢子*400分生孢子*1000鉴别要点 顶囊有单层和双层瓶梗，可与烟曲霉，土曲霉以及杂色曲霉和构巢曲霉相鉴别。分生孢子梗光滑，无色至褐色，菌落初为白继而黑色，可与黄曲霉鉴别。形态学观察 土曲霉菌落特征 －生长快 －菌落圆形 －孢子淡棕色或棕色形态学观察构巢曲霉绿色，浅黄到黄色（正面）紫红色到橄榄色（背面）顶囊（半球形或烧瓶状）小梗 双层，第一层略长孢子 (球形，粗糙，成链排列)形态学观察杂色曲霉菌落特征菌落生长慢紧密、圆形绒毛状到羊毛状颜色数种，从青绿到红绿曲霉菌形态特点曲霉菌菌落颜色分生孢子头分生孢子梗瓶梗正面反面烟曲霉灰绿、蓝绿浅黄柱状滑壁，无色或绿色单层黄曲霉黄-绿黄,褐放射状，成熟变柱状粗糙、无色单层、双层黑曲霉黑白,浅黄放射状，成熟变疏松滑壁，无色或棕色单层、双层土曲霉棕,肉桂浅黄、棕色柱状滑壁,无色双层构巢曲霉绿、浅黄浅紫、红,橄榄色短柱状滑壁，棕色双层杂色曲霉白、浅黄、黄、粉黄、灰白、