端粒在皮肤光老化中的作用改善皮肤光老化的临床与基础.pptVIP

-端粒在皮肤光老化中的作用-改善皮肤光老化的临床与基础 NB-UVB和PUVA：临床上光疗法（治银屑病、白癜风）的主要副作用之一是皮肤易出现光老化外观 内源性老化中的端粒缩短机制 1.是否参与紫外线辐射引起的光老化？ 2.光老化进程中光损伤是如何加快端粒缩短的？ 结 论 人参皂苷-Rg1可有效缓解细胞内氧化应激损伤，减少基因中光产物形成，减轻端粒损伤从而抑制端粒缩短，阻止端粒临界长度激活P53老化检查点，阻止细胞周期受抑的信号转导，降低老化相关蛋白表达水平，从而发挥显著的抗光老化作用 黄芩苷可有效保护人成纤维细胞免于氧化损伤和延缓光老化进程。其抗光老化机制包括延缓端粒缩短、调节老化相关基因包括p66、p53、p16、c-myc、MMP-1和TIMP-1表达有关，但黄芩苷对细胞端粒酶活性没有影响。 * * 南京医科大学第一附属医院皮肤科 骆 丹 闵玮 高英英 周炳荣 1.研究背景 光老化：在内源性老化的基础上加之环境因素（主要为紫外线辐射）的损害而发生的外源性老化，临床上表现为提前出现更加严重的老化表现。 PH 端粒与光老化 空白组1 UVA组 8-MOP+UVA组 空白组 UVA 8-MOP+UVA 8-MOP+UVA 照光三个月 的小鼠皮肤 光老化皮肤的动物模型观察光损伤作用 照光7d后各组细胞超微结构 8-MOP+UVA组细胞出现了明显的细胞衰老改变:胞浆中可见较多空泡，细胞核中可见较多 絮状物,核仁不清晰，局部出现核膜内褶,核内染色质凝集且分布不均。线粒体肿胀、粗面内质网扩张,脱颗粒，可见较多次级溶酶体。 8000× 8-MOP+UVA组 15000 × 8000× UVA组 15000 × 8000× 8-MOP组 15000 × 8000× 对照组 15000 × 端粒结构特点--光损伤易感性： 光老化中紫外线引起的基因的氧化应激损伤，大部分情况下发生在鸟嘌呤残基；端粒的重复序列TTAGGG二分之一是鸟嘌呤残基且3’末端也富含鸟嘌呤。 -TTAGGG-结构 2.端粒与光老化 光老化模型： 已联合利用8-MOP+ UVA建立小鼠皮肤光老化模型， 在此基础上利用人皮肤成纤维细胞经相同处理建立体外光老化模型 研究内容——实验流程 对照组 8-MOP组 or 8-MOP+UVA UVA组 MTT法检测 细胞活性绘制 细胞生长抑制 曲线 流式细胞术 检测细胞 周期分布 透射电镜 观察细胞 超微结构 细胞化学酶 法检测β-半乳糖苷酶 处理后24h，48h, 72h, 7d 分光光度法 检测细胞内 氧化应激损伤 水平 ：MDA, SOD及T-AOC 免疫荧光检测 细胞内氧化 光产物 8-oxo-dG Real-Time PCR检测端 粒的相对长 度：T/S Western Blot 检测细胞老化 相关蛋白P53, P21WAF-1及 P16INK-4a 药物组 1.各组细胞照光处理后各时间段细胞半乳糖苷酶阳性率 对照组 8-MOP组 UVA组 8-MOP+UVA组 照光后24h、48h、72h及7d后8-MOP+UVA联合处理组SA-β-Gal 阳性细胞比例较对照组均明显增高（*P0.01）， 且随时间积累而逐渐增高（r=0.988)。 结论： 8-MOP+UVA联合作用可使皮肤FB出现光老化生物学特性改变 SA-β-Gal 电镜 2. 照光后2h各组细胞光产物8-oxo-dG8-羟基脱氧鸟嘌呤 对照组 UVA组 ** * 8-MOP+UVA组8-oxo-dG阳性 细胞核比例明显高于对照组（**P0.01 ）；UVA组8- oxo-dG阳性细胞核比例也明显高于对照组（*P0.05 ）； 而8-MOP处理组较对照组无明显统计学差异（P0.05 ） 3. Real-Time PCR检测各组细胞端粒相对长度比较 8-MOP+UVA联合处理组端粒相对长度明显短于对照组（2.57±0.05 vs 6.63±0.12，P0.01）UVA照射组（4.59±0.07 vs 6.63±0.12, ） 8-MOP+UVA联合处理组（2.57±0.05 vs 4.59±0.07）端粒相对长度 经t检验比较均短于对照组（P0.05） ，后者端粒长度更短。而