第10章经液相色谱法.ppt

经典液相色谱法 药物分析教研室 本章内容 第1节 液-固吸附柱色谱法 第2节 液-液分配柱色谱法 第3节 离子交换色谱法 第4节 空间排阻色谱法 第5节 薄层色谱法 第6节 纸色谱法 要求 1.掌握液相色谱技术的基本原理。 2.熟悉吸附等温线。 3.了解液相色谱技术的基本操作。 概 述 定义 分类  按操作形式 按分离机理 按分离效率 定义：以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法。 柱色谱法 操作形式 平面色谱法 吸附色谱法 分配色谱法 分离机理 离子交换色谱法 空间排阻色谱法 经典液相色谱法 分离效率 现代液相色谱法 经典液相色谱法： 是在常压下靠重力或毛细作用输送流动相的色谱方法。 经典柱色谱法 平面色谱法。 经典与现代的区别主要在： 输送流动相方式 固定相规格 分离效能 分析速度 检测灵敏度 第1节 液-固吸附柱色谱法 一. 基本原理 二. 吸附剂 三. 色谱条件的选择 四. 操作方法 吸附色谱法：一种溶质基于吸附现象而获得分离的液-固色谱分析方法。 用于分离分析极性至弱极性的化合物，不适用于分离分析强极性的物质。 经典的液—固吸附色谱（LSC）： 以吸附剂为固定相，有机溶剂为流动相，利用不同组分在吸附剂上吸附性能的差异，进行分离分析的方法。 柱色谱法： 将固定相装于柱管内就构成色谱柱，色谱过程在柱内进行的一类色谱方法。 依据 吸附过程的两个规律： 1 )吸附剂对不同物质的吸附行为有差异。 2 ) 吸附过程是可逆的，存在着吸附 解吸附的动态平衡。 一.基本原理 （一）吸附与吸附平衡 （二）吸附等温线 （一）吸附与吸附平衡 流动相通过固定相时，吸附剂表面的活性中心吸附流动相分子，当组分分子进入柱子时，会赶走流动相分子而占据吸附剂的活性中心位，即组分被吸附。 反之，溶剂分子也可把溶质分子赶走，即解吸附。 吸附平衡常数K Cs为溶质在固定相的浓度 Cm为溶质在流动相中的浓度。 吸附平衡常数K是与组分的性质、吸附剂和流动相的性质与温度有关的一个常数。 不同溶质K值不同，K值决定色谱特性。 K值大，吸附牢移动速度慢，较后洗出； K=0，不被固定相吸附。 在进行色谱条件选择的时候，要尽量使混合组分的K值相差较大，混合样品就可以达到分离。 （二）吸附等温线 1. 定 义 2. 应 用 3. 分 类 1. 定 义 指在一定温度下，某一组分在固定 相和流动相之间达到平衡时，组分 在固定相中的浓度Cs对组分在流动 相中的浓度Cm作图得到的曲线，用 函数描述为Cs=f（Cm）。 2.特性 等温线形状是重要色谱特性之一。 反映一定温度下，吸附剂对溶液中某一组分的吸附能力。 描述组分在两相中浓度间的关系。 对某一体系，组分的分布取决于吸附等温线。 3. 分 类 直线型→理想 等温线类型 凸型→多数 非线型 凹型 低浓度时，每种等温线均呈线型 高浓度时，等温线会发生弯曲，呈凸型或凹型。 （1）线型吸附等温线 ①定义：达到平衡时，组分在固定相中的浓度Cs与其在流动相中浓度Cm成正比，直线斜率为K＝Cs/Cm，其吸附等温线为线型。 ②特点：a.组分移动速度依赖于K的大小，分离时移动速度不变，K越大移动速度越慢 。b. 流出曲线呈对称形。c.前不伸舌，后不拖尾。 （2）凸型吸附等温线 ①定义： K值随组分浓度增加逐渐减小，其吸附等温线呈凸型。 ②特点：随着流动相中组分浓度增大相对吸附量缓慢减小，tR变小，色谱流出峰的极大值偏向谱带前沿，导致峰形拖尾。 ③原因之一：吸附剂表面活性中心的不均一性。 溶质在不同吸附点位上K不同。溶质分子总是先占据吸附力强的点位（K值大），再占据吸附力弱的点位（K值小），所以K值会在强吸附力点位被饱和后随着溶质浓度的增加而逐渐减小，使吸附等温线呈凸型 。 防止拖尾的方法： ①在色谱分析中控制组分的量，使其在一定的线性范围。 ②在流动相