枇杷叶总黄酮超声波辅助提取及其抑菌效果研究.docVIP

枇杷叶总黄酮超声波辅助提取及其抑菌效果研究 　　摘要：以枇杷（Eriobotrya japonica Lindl.）叶为原料，采用超声波辅助法提取枇杷叶中总黄酮，并对其抑菌效果进行测定。结果表明最佳提取工艺条件为：料液比1∶15（g∶mL），提取温度50 ℃，提取时间30 min，此条件下的总黄酮提取率为56.30 mg/g；总黄酮提取物对大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）有较强的抑制作用，对黄曲霉（Aspergilus flaus）和啤酒酵母（Saccharomyes cerevisiue）的抑制作用较差。 　　关键词：枇杷叶；总黄酮；提取；抑菌 　　中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）10-2383-03 　　枇杷（Eriobotrya japonica Lindl.）为蔷薇科（Rosaceae）枇杷属（Eriobotrya）植物，起源于中国，迄今已分布到全世界的30多个国家[1]。枇杷的功效也越来越多地被研究，而枇杷叶的作用也越来越受到关注。枇杷叶是一味常用中药，其味苦、微辛，性微寒，具有清肺止咳、降逆止呕作用[2]。近年来，国内外对枇杷叶的化学成分和药理作用研究较多，结果显示已经分离得到的化学成分有三萜酸、黄酮类、多酚、倍半萜及其苷类。黄酮类化合物苷元主要为山奈酚、槲皮素，糖苷由1～3单糖组成。此外，还发现有乙酰化黄酮苷存在[3]。研究表明，生物总黄酮在身体中扮演着重要的角色，能降低血管脆性及异常的通透性，可以用来降低血脂和胆固醇，还具有止咳化痰功效[4]。同时可帮助人体对抗病毒、致癌物、毒素与过敏物质，同时具有一定的抑菌杀菌功效[5，6]。 　　本试验以淮阴工学院内的枇杷树叶为原材料，采用超声波辅助法提取总黄酮，再利用提取的黄酮类化合物来研究抑菌效果。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验原料 　　新鲜枇杷叶（采自淮阴工学院校园）：洗净、烘干、粉碎40目待用。 　　供试菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、黄曲霉（Aspergilus flaus）、啤酒酵母（Saccharomyes cerevisiue）（均由淮阴工学院生化学院微生物实验室提供）。 　　培养基：细菌用培养基，营养琼脂培养基；霉菌、酵母菌用培养基，马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）。 　　1.2 试剂与仪器 　　试剂：无水乙醇、硝???铝、亚硝酸钠、氢氧化钠、芦丁标准品。 　　试验仪器：紫外-可见分光光度计、生化培养箱、灭菌锅、数显恒温水浴锅、电子天平、超声波提取器等。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1 标准曲线的绘制 采用亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法制作芦丁标准曲线。 　　1.3.2 待测样品制备 准确称量2 g烘干粉碎为60目的枇杷叶，加入一定的提取剂，经超声波辅助有机溶剂提取一定时间后，离心过滤，定容到50 mL，制成待测样。 　　1.3.3 单因素试验 ①超声波功率对枇杷叶总黄酮提取率的影响。在反应温度为50 ℃，反应时间为60 min，料液比1∶10（g/mL）条件下，在510 nm下测定吸光度值，计算提取率，考察不同超声波功率对枇杷叶中总黄酮提取率的影响。②料液比对枇杷叶总黄酮提取率的影响。在反应温度为50 ℃，提取时间为60 min，超声功率为150 W，在510 nm下测定吸光度值，计算提取率，考察不同料液比对枇杷叶中总黄酮提取率的影响。③提取温度对枇杷叶总黄酮提取率的影响。在反应时间为60 min，超声功率为150 W，料液比为1∶10（g∶mL），在510 nm下测定吸光度值，计算提取率，考察不同提取温度对枇杷叶中总黄酮提取率的影响。④提取时间对枇杷叶总黄酮提取率的影响。在反应温度为50 ℃，料液比1∶10（g∶mL）条件下，超声功率为150 W，在510 nm下测定吸光度值，计算提取率，考察不同提取时间对枇杷叶中总黄酮提取率的影响。 　　1.3.4 正交试验 为确定超声波辅助提取枇杷叶总黄酮的最优工艺，在单因素试验的基础上，选用L9（33）正交表进行正交试验，考察料液比（A）、温度（B）、提取时间（C）的交互作用对枇杷叶中总黄酮提取率的影响，因素与水平见表1。 　　1.3.4 总黄酮的抑菌效果测定 菌悬液的制备：将相应的菌种接到斜面培养基上，细菌在（37±1） ℃下恒温培养24 h，霉菌和酵母菌于（28±1） ℃下恒温培养48 h，连续培养3次，以无菌生理盐水配制成孢子或菌体悬浮液，浓度为106～107 CFU/mL，备用。 　　抑菌作用的测定：采用滤纸片法，以无菌生理盐水和0.5%山梨酸钾水溶液作为对照。将直径为6