第二章 天然药物化学成分提取分离鉴定方法与技术(色谱法)_PPT课件.pptVIP

第二章 提取分离鉴定的方法与技术 ——色谱法 1 碳酸钙 （固定相） 色素混合液 石油醚 (流动相） 1906年，Tsweet发现色谱分离现象 色谱柱 2 “像光谱中的光线一样，色素混合物的不同组分有规律地排列在碳酸钙柱上而彼此分离。” ——Tsweet,《德国植物学报》, 1906. 3 柱色谱 薄层色谱 纸色谱 高效液相色谱 色谱法（Chromatography） 一、色谱法在研究天然药物有效成分中的应用： 分离混合物 精制化合物 鉴定化合物 4 二、原理： 利用混合物中各成分在固定相和移动相中吸附、分配及其亲和力的差异而达到分离。 色谱的三要素 5 三者相互关系 ？ 按原理不同可分为： 吸附色谱法* 分配色谱法* 离子交换色谱法 凝胶滤过色谱法（分子筛滤过色谱） 大孔吸附树脂法 高效液相色谱法（自学） 气相色谱法（自学） 6 三、分类： 3）吸附色谱的三要素 9 在液-固吸附色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于下列三个因素： 10 11 硅 胶：适用于中性和酸性成分 氧化铝：适用于中性和碱性成分 活性炭：非极性吸附剂 聚酰胺：高分子聚合物,氢键吸附 a、吸附剂（固定相） 12 硅胶（silica） SiO2  XH2O 酸性、亲水性吸附剂。 结构：内部----硅氧交联结构→多孔结构→范德华力 表面----有硅醇基→氢键吸附 适用于中性或酸性亲脂性成分的分离。 13 特性： 1）极性吸附剂，“相似者易吸附” 物质极性↑，吸附能力↑ 2）吸水→失活 105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力 注意：活化温度不宜高，不宜分离碱性物质。 氧化铝（aluminium oxide） 极性吸附剂，最适于分离植物中的碱性或中性的亲脂性成分。 有酸性、碱性和中性三种规格。 吸附特性与硅胶类似，但碱性氧化铝不宜分离酸性物质。 14 聚酰胺（polyamide） 结构：--[CH2-CO-NH-]-n 原理：氢键吸附学说 15 酰氨基与化合物（羟基、羧基及醌基）形成氢键吸附。 16 用途： 分离黄酮类、酚类、醌类、有机酸类及鞣质。 影响吸附强弱的因素： 1、流动相：水＞甲醇或乙醇＞丙酮＞氯仿＞稀氨水＞甲酰胺; 2、分子结构：a、形成氢键数目多，吸附能力强。b、形成分子内氢键，吸附力减弱。C、芳香化合物中，共轭双键多，吸附牢。 化合物结构对聚酰胺吸附作用的影响 形成氢键的数目 成键基团位置 双键的数目 分子内氢键 17 课本第33页 活性炭（activated carbon） 非极性吸附剂，对非极性物质具有较强的亲和力，在水中对溶质表现出强的吸附能力。 从活性炭上洗脱被吸附的物质时，溶剂的极性越小，洗脱能力越强。 18 特别适合水溶性物质的分离。 b、溶 剂 （移动相） 遵循“相似相溶”及“相似者易吸附”原理： 极性吸附剂，溶剂的介电常数愈大，洗脱能力愈强； 非极性吸附剂，溶剂的介电常数愈大，洗脱能力愈弱。 c、被分离物质 遵循“相似相溶”及“相似者易吸附”原理： 对于极性吸附剂而言： 被分离成分极性大，吸附牢，难以洗脱； 被分离成分极性小，吸附力弱，容易洗脱。 19 四、操作方式 1、薄层色谱法（TLC）* 定义：将吸附剂均匀的铺在平板上，把要分离分析的样品点加到薄层色谱板上，然后用适当的溶剂系统展开，在一定的条件下显色或直接在日光或紫外光下观察所获得的斑点，从而达到分离、分析、鉴定的目的。 20 1）薄层色谱的吸附剂和支持剂： 在选用吸附剂或支持剂时，一般是根据被分离物质的化学性质来选用。当不了解被分离物质的化学性质时，可以先选用最常用的硅胶或氧化铝，如果分离效果不好，可再改用其他的吸附剂或支持剂。 21 常用的硅胶吸附剂 粒径：200-300目 种类：硅胶G——硅胶+粘合剂煅石膏 硅胶GF254——含有荧光物质 硅胶H ——不含粘合剂煅石膏 硅胶HF254 ——含有荧光物质 22 常用的展开剂 正己烷、环己烷 、四氯化碳、甲苯、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、乙醇、甲醇、水 23 理想的溶剂应能使混合物分离后各组分的Rf值相差尽可能大，且尽量在0.2-0.8之间。 当单一溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。 2）薄层色谱的一般操作 a、制板 b、活化 c、点样 d、展开 e、显色 f、计算比移值 24 操作技术——手工铺板 取一份吸附剂和三份水（或另加黏合剂），在研钵