粗毛栓菌木聚糖酶的初步分离与化 答辩表.docVIP

学院本科生毕业设计开题报告 毕业论文题目 粗毛栓菌木聚糖酶的初步分离与纯化 题目类型 实验 题目来源 指导教师拟定 院（系） 生命科学系 专 业 生物工程 指导教师 职 称 教授 姓 名 年 级 06级 学 号 一、立题依据(国内外研究进展或选题背景、研究意义等) 木聚糖的完全降解需要木聚糖水解酶系中各种酶之间协同完成，木聚糖酶系包括内切β-木聚糖酶，外切β-木聚糖酶和β-木二糖苷酶，内切木聚糖酶( endo-1，4D-xylan xylanohydrolase; EC3.2.1.8) 简称木聚糖酶，能够水解木聚糖分子β-1 ，4 ，， 2、对粗毛栓菌产木聚糖酶的分离纯化及其部分性质进行初步研究。 3、对粗毛栓菌木聚糖酶进行纯化, 并对性质进行探讨, 以便为木聚糖降解的研究提供一定的科学依据, 同时为在造纸工业和食品加工上的应用提供一定的理论依据。 三、研究方案（思路） 1、对粗酶液进行超滤浓缩、盐析后低温冷冻离心除去杂蛋白。 2、再盐析过夜后低温冷冻离心收集沉淀。 3、透析。 4、Sephadex G-150分子筛层析：收集具有较高酶活力的部分。 5、对有酶活力的部分进行盐析过夜、离心、透析后再用聚乙二醇浓缩。 6、测定收集酶液的酶活力及该酶液的蛋白质含量。 7、收集的酶液进行活性聚丙烯酰胺凝胶电泳。 8、电泳后切成2mm的胶条后与DNS反应，确定木聚糖酶存在的位置以便进行回收。 四、论文进度安排 1、4月5-6日，粗酶液的盐析、离心、透析。 2、4月7-8日，配制实验试剂，测定酶活力及蛋白质含量。 3、4月9-12日，分子筛层析装柱、平衡柱。 4、4月13-19日，分子筛层析的上样、洗脱，测定酶活力及蛋白质含量。 5、4月20日，对层析材料进行后处理。 6、4月21-24日，再次进行盐析、离心、透析，测定酶活及蛋白质含量。 7、4月25-29日，木聚糖酶的活性聚丙烯酰胺凝胶电泳。 8、整理数据，撰写论文。 五、主要参考文献 [1] 李海燕，祝令香，毛爱军，董志扬. 2005．黑曲霉木聚糖酶在工业酒精酵母中的分泌表达[J].徽生物学报，45(1):135-138. [2] 曾艳，刘铁汉，周培谨，马延和．2004．嗜碱菌Bacillus sp．ZBAW6的木聚糖酶的分离纯化及性质．微生物学报，44(1):75-78. [3] Hee P, Hoeben MA, Vander RC et al．2006．Strategy for selection of methods for separationof bioparticle mixrures [J]. Biotechnology and Bioengineering,，94 (4): 689-709. [4] 阎金勇，丁双等．2007．微生物酶分离纯化研究进展. 现代化工，27(6)：19-23. [5] ，任少亭，毕瑞明，2002.粗毛栓菌降解麦草木质纤维素的实验研究.微生物学杂志，22(1):24-26 [6] 北京大学生物系生物化学教研室，生物化学实验指导. 1979年7月第一版. 高等教育出版社，北京. [7] 张承圭，王传怀，袁玉荪等合编，生物化学仪器分析及技术．1990年4月第一版. 高等教育出版社，北京. [8] Elisashvili， V. I.， Khardziani T. S.and Tsiklauri N. D.Cellulase and xylanase activities in higher basidiomycetes. Biochemistry , 64 (6): 718-22. [9] Miller,G. L. 1959. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar. Anal. Chem，31 (3): 426-428. [10] Bradford MIN. 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye biding. Analytical Biochemistry, 72 (0): 248-254. [11] 卢圣栋主编，现代分子生物学实验技术. 1999年12月第二版. 中国协和医科大学出版社，北京. [1２] 范美霞，付灿，，陶宗娅，2010. 粗毛栓菌木聚糖酶的纯化及性质.菌物学报，29(1):83-90. 六