HIVAIDS免疫异常激活及其与疾病进展相关性研究.docVIP

HIVAIDS免疫异常激活及其与疾病进展相关性研究 　　[摘要] 目的：分析我国艾滋病患者的免疫异常激活水平及其与CD4+T细胞计数、疾病进展的相关性，探讨免疫异常激活在HIV/AIDS发病中的作用。方法：通过检测287例不同病情的未接受过任何治疗的HIV/AIDS患者外周血CD4+T细胞计数，免疫异常激活标志物及血浆病毒载量，对相关数据进行相关性分析。结果：不同疾病进展阶段的HIV/AIDS患者免疫异常激活水平显著不同，随着疾病进展，免疫异常激活水平显著升高。且外周血CD4+T细胞计数与免疫异常激活标志物呈显著的负相关。结论：感染HIV后诱导的免疫异常激活可能是导致CD4+T细胞计数逐渐降低及疾病进展的机制之一。 　　[关键词] HIV；AIDS；免疫异常激活；疾病进展；相关性 　　HIV介导的直接杀伤作用曾被认为是CD4+T细胞减少的主要原因[1]。但研究发现，单单高HIV病毒载量似乎并不足以导致病情加重及疾病进展。有研究表明，在HIV/AIDS中，外周血中实际被HIV病毒感染的CD4+T细胞数量很低，绝大多数死亡的CD4+T细胞是未被病毒感染的细胞[2]。这说明HIV的直接杀伤并不能解释CD4+T细胞的迅速减少。因此，在艾滋病发病及进展过程中，可能有其他机制的参与。艾滋病中的慢性免疫激活现象是Ascher和Sheppard首先提出的[3]，感染HIV病毒后，HIV抗原的持续刺激使机体免疫系统处于异常增高的激活状态，这种慢性的异常激活，是艾滋病的重要特征，也是HIV相关的免疫缺陷的原动力。目前，HIV/AIDS中的免疫激活现象国外研究较多，国内HIV/AIDS患者的免疫激活状态如何及其与疾病进展的关系报道较少。本研究拟通过检测287例不同病情的未接受过任何治疗的HIV/AIDS患者外周血CD4+T细胞计数，免疫异常激活标志物及血浆病毒载量，分析我国艾滋病患者的免疫异常激活水平及其与CD4+T细胞计数、疾病进展的相关性，探讨免疫异常激活在HIV/AIDS发病中的作用。 　　1 材料 　　1.1 研究对象 287例未接受过抗病毒治疗的HIV/AIDS患者，均来源于云南省文山州中医医院、云南省传染病医院/关爱中心、广西瑞康医院、广西柳州龙潭医院、湖北中医药大学临床医学院、遵义医学院附属医院，所有入选病例均为HIV抗体阳性，经Western Blot确认试验证实。排除???妇、合并有自身性免疫性疾病的患者及肝肾功能异常者。另选取性别、年龄相匹配的40例HIV抗体阴性健康鲜血员为对照组，均为来源于广安门医院的工作人员，所有受试者均于采血前签署知情同意书。 　　1.2 主要仪器 FACS Calibur流式细胞仪（美国BD公司）及System 340 bDNA Analyzer病毒载量分析仪（德国Bayer）等。 　　1.3 主要试剂 CD3/CD8/CD45/CD4，CD8/CD38/CD3/HLA-DR，IgG1/IgG1/CD3/IgG等四色荧光抗体（美国BD公司）；FACS Lysing Solution（溶血素）（美国BD公司）；HIV-1 RNA 3.0 Assay试剂盒（德国Bayer公司）。 　　2 方法 　　2.1 标本采集及PBMCs的分离 含有EDTA抗凝剂的5 mL真空采血管采集静脉血2 mL，然后轻轻颠倒抗凝管8次，使血液与抗凝剂充分混匀，防止血液凝固。在4 ℃保存和运输样品，在6 h之内送达检测实验室进行处理，24 h之内完成检测。 　　2.2 外周血淋巴细胞计数检测 绝对计数：取新鲜全血50 μL，放入专用的CD4+T绝对计数管中，加入CD3-FITC/CD4PE/CD8Percp抗体，混匀后，室温避光孵育15 min，加入450 μL免洗溶血素，充分混匀，室温避光15 min后上机，采用Multi SET软件自动计数系统检测CD4+T细胞及CD8T细胞绝对计数。 　　相对计数：于流式上样管中加入相应抗体各20 μL，取100 μL全血加入到相应的试管中，不要碰到管壁（若碰到管壁，须用棉签擦干净）。涡旋混匀，室温避光放置20 min。取出试管，每管加入1倍稀释的FACS Lysing Solution 2 mL，轻轻混匀（低速，3 s），避光10 min。待管内液体透亮。然后1 200 r·min-1，离心5 min，弃去上清液。每管加入2 mL的PBS，轻轻混匀（低速，3 s），1 200 r·min-1，离心5 min，弃去上清液。加入0.5 mL PBS混匀，4 ℃避光，1 h内使用BD Cellquest Pro软件获取样本，上机前应充分混匀。使用BD Cellquest Pro软件分析获取的样本，以CD3+/SSC圈T淋巴细胞门，以IgG1/IgG1/CD3/IgG1为同