大气PM2.5对原代培养大鼠心肌细胞的毒性研究.pptVIP

沙尘与非沙尘PM2.5对人肺成纤维细胞存活率及细胞间通讯的影响 郭新彪1 王菲菲2 1北京大学医学部公共卫生学院 2中国环境科学研究院环境污染与健康室 主要内容 研究背景 实验方法 实验结果 小结 研究背景 1.颗粒物的一般概念与理化性质 由于颗粒物是悬浮在空气中的一种复杂的混和物，因此其对健康影响的性质和程度与颗粒物的来源、大小以及其所吸附的化学物和生物病原体等有关。 1-1.颗粒物的粒径与浓度 从环境与健康的角度，一般根据空气动力学直径将颗粒物分为TSP，PM10，PM2.5三类。 PM2.5由于粒径小、表面积大，在空气中滞留时间长，与有害气体的结合率高，易避开气管细胞纤毛等过滤机制进入下呼吸道，可沉积在肺泡，甚至可经过肺换气到达其他器官，因此目前是大气颗粒物研究的热点。 近年来，我国沙尘暴的发生频率呈上升趋势且波及的范围越来越广，沙尘天气时颗粒物浓度增高，引起能见度下降。 1-2.颗粒物的来源与组成 颗粒物来源可分为自然和人为的来源。 颗粒物的化学成分多达数百种以上，可分为无机和有机两大类。颗粒物的毒性与其化学成分密切相关。 按中国气象局的分类标准，沙尘天气分为浮尘、扬沙、沙尘暴和强沙尘暴。沙尘颗粒物是沙尘天气发生时的大气颗粒物。研究表明风沙期间大气气溶胶与无风沙时气溶胶的物理化学特征有明显的差异 。 2.颗粒物对人体健康的影响 长期以来，大量流行病学研究发现PM2.5浓度的增高与心肺疾病的超额发病率、死亡率相关，尤其在原先患有呼吸、心血管系统疾病的人群及老年人中。 美国EPA的五年报告认为大气颗粒物的暴露程度与死亡率和发病率定量关系的建立是1997－2002年间取得的最显著的研究成果之一。 2-1.颗粒物的呼吸系统毒性 不少研究还发现，大气中PM2.5浓度的上升与咳嗽等呼吸道症状的产生、肺功能减弱及哮喘的发病相关。 颗粒物的急慢性呼吸系统毒性流行病学和毒理学的研究结果。 2-2.沙尘颗粒物对人体健康的影响 有关沙尘颗粒物对人体健康影响的研究以及毒理学研究目前还比较少。文献报道沙尘暴颗粒物与哮喘、肺纤维化、风湿病、黑热病以及肺炎等有关。 我们最近的研究显示，沙尘暴颗粒物可对人肺成纤维细胞、肺泡巨噬细胞产生明显毒性，且PM2.5的毒性大于PM10；沙尘暴颗粒物还可导致巨噬细胞吞噬能力降低，促进巨噬细胞释放NO、IL－8、TNF-α等炎性因子 。 3.细颗粒物的毒性机制研究 虽然流行病学和实验室研究已经有很多的证据表明细颗粒物对人体健康有很大危害，但是目前对细颗粒物的毒性机制研究尚处于探索阶段，不少学者都提出了各自的假设。指出颗粒物的毒性与其来源、粒径及化学成分存在密切的关系。目前普遍被认可的假说主要有氧化应激和信号传导假说。颗粒物介导的氧化应激反应激活了一系列的细胞信号传导途径，从而最终产生病理改变。 4.GJIC简介 细胞连接是多细胞有机体中相邻细胞之间通过细胞质膜相互联系，协同作用的重要组织方式。 间隙连接(gap junction)是动物细胞间最普遍存在的细胞连接。 构成间隙连接的基本单位称连接子。每个连接子由6个相同或相似的跨膜蛋白亚单位环绕，中心形成一个直径约1.5nm的孔道。细胞间隙连接通讯(GJIC)有十分重要的生理功能。 5.本研究实验设计 本次实验选用甘肃省武威市3－5月份沙尘与非沙尘天气的大气颗粒物作为研究对象。 从相同质量的颗粒物上分别提取全颗粒、无机成分和有机成分并计算出三者质量之比，以全颗粒物当量按比例计算出各成分染毒剂量系列，通过毒性实验推测究竟何种成分在颗粒物的损伤中起主导作用。 选择细胞存活率大于85％的浓度范围，测定GJIC水平。 初步探讨沙尘与非沙尘天气的大气颗粒物在生物效应上是否有差异，并为揭示细颗粒物的毒性机制奠定基础。 实验方法 1.颗粒物的采集 颗粒物由北京大学环境学院胡敏教授提供。采样地点位于腾格里沙漠附近的甘肃省武威市，采样仪器离地面10m，周围无高大建筑物阻挡，也无重大污染源。采样时间为2004年3－5月，采用PM2.5大流量大气采样器连续采样，以石英纤维滤膜收集颗粒物，每天换膜1张。本研究根据当地气象部门和环保检测站资料，结合国家《环境空气质量标准》（GB3095-1996）和《沙尘天气预警业务服务暂行规定（修订）》（气发[2003]12号），将样品分为沙尘颗粒物和非沙尘颗粒物。 2.PM2.5样品的制备 膜的平衡 全颗粒悬液的制备 颗粒物无机提取物的制备 颗粒物有机提取物的制备 染毒浓度系列的配制：根据计算，本次样品沙尘PM2.5不同组分的质量比（全颗粒：无机提取物：有机提取物）为1：0.14：0.06，非沙尘为1：0.48：0.16。按照上述比例，将不同组