分子遗传学 11DNA复制 B.ppt

1968年Gilbert提出 滚环复制模型: （1）共价延伸； （2）模板链和新合成的链 分开; （3）不需RNA引物，在正 链3‘－OH上延 （4）只有一个复制叉; （5）形成多联体（concatemer ）; 滚环复制的电镜照片 哪些DNA进行滚环复制? 真核rDNA的扩增, F因子DNA的转移, λ裂解途经的复制, φX174, M13. G4等 单链环状DNA噬 菌体 第二阶段复制都是进 行滚环复制的. 二.DNA末端起始复制 线性双链DNA的复制有的是从一端开始的: 腺病毒（Adenovirus） φ29 DNAs 脊髓灰质病毒（poliovirus) 腺病毒DNA全长35937 bp,线性双链， 两端各有反向重复顺序103～162 bp，两末端各有50 bp为复制起点。 其复制是以单链置换（strand displacement）形成一个大的茎环或叫平锅形结构来进行的。 三.复制的终止 1.E.coli的复制终止 现已发现有两个终止区域（terE,D,A和ter C,B），位于相遇点的另一侧100Kb处。每一终止顺序对某一方向移动的复制叉来说是特异的。 ter顺序有一个23bp的区域，在体外可导致复制的终止，但其功能显示了一定的方向性。 终止需要tus(terminus utilization substance)基因的产物Tus(36kD)， Tus能识别ter保守顺序，并阻止复制叉继续前进。 ter-Tus复合物可能通过抑制螺旋酶来实行终止 第六节 复制的过程 一.半不连续复制 E.colidUTPase，它能使dUTP变成dUMP，dUMP是不能作为DNA合成的底物，这样它就不再能加入DNA中。 尿嘧啶N-糖苷酶（uracil N-glycosylase），它可以切断混合尿苷的糖苷键，形成无Pu和Py位点（apurinic or apyrimidinic ，AP），再由AP内切酶在AP位点切出一个缺口，进一步进行切除修复。 以下实验证实了这个解释： (1)在dut -突变体（dUTPase缺失）中冈崎片段比在dut +中为短。这是因为U掺入机会增加； (2)在ung- （尿嘧啶N-糖苷酶缺失）突变体中，新合成的DNA约有一半由片段组成。 (3)因为尿嘧啶N-糖苷酶缺失，不会切除U的糖苷链，也就不会出现AP位点，所以碱沉淀时不易断裂，从而保持了半不连续的原貌。 在dut-, ung-双突变体中，结果和实验（2）相同，更进一步证实了此推测。 酵母的自主复制区 ARS(autonomously replicationg sequence) 发挥复制起点的功能，但是过量的。 酵母染色体Ⅳ的着丝粒附近为ARS1序列 ARS1分为A,B,C三个功能区, A,B起主要作用,C起次要作用。 A区为15bp,其中11个保守，称ACS (ARS consensus sequence)。有复制起始子的功能 B区约为80bp,含B1,B2,B3三个功能区。 B3是ABF1（ARS-binding factor 1）结合区， 酵母的复制 ORC：由6个亚基组成相当于Dna A和 λ的O蛋白，与 A/B1结合，结合于游离的DNA Cdc6:相当于DnaC,及λ的P蛋白，使Mcm蛋白结合到复合体上。此对在Origin上起始复制是必须的。 Mcm: DnaB 螺旋酶。即 licensing factor ABF1（转录因子）结合于B3 原核和真核生物复制体系的比较 E.coli λ SV40/人 酵母 功能 DnaA O T抗原 ORC 起始蛋白 DnaB DnaB T抗原 MCM 解旋酶 DnaC P ? Cdc6 装配因子 DnaG DnaG Polα-引发酶 Polα-引发酶 引发酶 PolⅢ的 α亚基 Polδ Polδ,Polε 聚合酶 PolⅢ的ε亚基