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BRCA1蛋白结构与功能研究 　　摘要：指出了BRCA1蛋白是一种结构复杂，功能多样的大分子，有多种结合位点，两端的RING和BRCT结构域能与多种相关蛋白结合。它在核内产生，但是当DNA损伤时，会发生出核现象，并且和多种磷酸化蛋白共同作用维持基因组的完整性。发现在多种肿瘤细胞中BRCA1的表达有变化或有突变，至于这些变化是否引起肿瘤尚不确定，因此对BRCA1蛋白功能的研究将有利于阐明肿瘤的发生机理。回顾和总结了BRCA1在DNA损伤修复、细胞周期、转录、细胞凋亡等细胞过程中的作用。 　　关键词：BRCA1；DNA损伤修复；细胞周期；转录；细胞凋亡 　　1引言 　　BRCA1是一种肿瘤抑制基因，它和多种肿瘤抑制基因共同作用，抑制肿瘤的生长。肿瘤的发生是因为局部组织的细胞在基因水平上失去了对其生长的正常调控，导致细胞异常生长，一旦控制细胞增殖及生长的基因（如生长因子）发生突变或过量表达，肿瘤疾病极有可能发生。早期研究发现，BRCA1是乳腺癌易感基因，BRCA1蛋白和多种相关蛋白共同作用维持基因组的稳定，并且受到转录控制、磷酸化和蛋白相互作用等机制的调节，最近研究表明，其蛋白功能可能还受到BRCA1亚细胞分布的功能调节[1]。而事实证明BRCA1蛋白在DNA损伤修复、细胞周期、基因转录调节、细胞凋亡等机制中发挥着重大的生物学功能。 　　2BRCA1基因及蛋白的结构 　　2.1BRCA1基因的结构 　　BRCA1基因定位于人类染色体17q21，由24个外显子组成，包括22个编码外显子，2个非编码外显子，全长约为100Kb，转录产物mRNA为7.8Kb[2]，其中第11外显子为核心外显子，编码60%以上的氨基酸序列。该基因有两个不同的启动子promoter1和promoter2，，共同调节BRCA1的转录活性，且两者活性保持一定比例，并以promoter1为主[3]。 　　2.2BRCA1蛋白的结构 　　BRCA1蛋白是由1863个氨基酸组成的生物大分子，其N端有一个RING结构域，C端有两个纵串排列的BRCT结构，中部含有核内信号定位区（NLS1和NLS2），参与蛋白质的核内转运[4]，与其他任何已知蛋白没有同源性[5]。 　　3BRCA1蛋白的功能 　　3.1BRCA1参与DNA损伤应答 　　DNA损伤包括双链损伤（DSB）和单链损伤（SSB）。DSB是最常见的DNA损伤之一，在众多细胞内基???损伤中是最危险的，SSB指的是DNA双链结构中一条链的核糖-磷酸骨架锻裂，由于细胞每天都发生上万的SSBs，如果得不到及时的修复，SSBs就会产生基因碎片，甚至导致致死性DSBs。DNA损伤之后，主要是通过核苷酸切除修复，碱基切除修复，转录偶联修复，错配修复，DNA链间交联修复，同源重组修复，非同源末端修复等方法来修复损伤DNA（图2）。 　　图1BRCA1蛋白的结构及相关蛋白结合域 　　图1BRCA1在DNA损伤修复中的地位 　　从最近10年的研究来看，DNA损伤修复主要以ATM和ATR两条途径为主要修复手段，ATM和ATR可以使下游的靶基因磷酸化，最终磷酸化BRCA1，使BRCA1的多个结合位点活化，从而参与多种信号传导通路。 　　DNA损伤后，DNA损伤传感器进行探测并发出损伤信号，通过ATR、ATM传导，当信号传递到BRCA1时，其多个结构域开始活化，与多个蛋白分子相互作用形成复合体，共同定位到损伤部位并进行修复[7]。在应答DNA损伤时，最先发生的是组蛋白H2AX的磷酸化，磷酸化的H2AX和BRCA1动态结合在一起，由于BRCA1有多个结合位点，能同时结合RAD51，动态定位到亚核 foci，这种亚核foci能重新分配到DNA损伤链上[5]，对DNA进行修复。 　　DNA损伤促进ATM和MRN复合体结合，使之自动磷酸化和乙酰化，处于激活状态，而ATR和ssDNA-RPA作用物ATRIP结合，磷酸化Chk1并激活Chk1，最终调控细胞周期检验点，活化的ATR直接作用于BRCA1。激活状态的ATM可导致BRCA1上的Ser1387、Ser1423、Ser1457、Ser1524磷酸位点磷酸化。Chk2是ATM的靶蛋白，能与BRCA1相互作用，使BRCA1的Ser988磷酸化。 　　BRCA1直接与P53结合，激活P21、Gadd45等下游靶基因，选择性增强DNA修复及细胞周期检验点有关基因的表达。BRCA1与P53，BRCA2同时聚集到DNA损伤部位进行修复损伤。P53和ATF1是具有特异性位点的转录因子，BRCA1与其相互作用，调节其基因活性，并对DNA损伤进行切除修复。同时BRCA1与BRCA2、RAD51、FANCD2形成四聚体，完成DNA链间交联修复，BRCA1还可与MSH2、MSH6形