培养基制作及灭菌.ppt

实验一 培养基制作及灭菌 尹会方 2010.5.16 培养基概念 培养基是人工配制的微生物生活环境，其主要用途是繁殖及分离接种微生物，传代或保存微生物，鉴别微生物的类属，研究微生物的生理及生化特性，制造菌苗、疫苗或其他微生物制剂等。其营养成分包括微生物生长所需要的水分、碳源、氮源、无机盐及某些生长因子（维生素、辅酶）等。 实验一 培养基配置和灭菌 一、实验目的 1. 掌握微生物学实验中常用的玻璃器皿的包扎方法与棉塞得制作 2.了解配制培养基的原则，并掌握配制培养基的一般方法和步骤 3.了解加压蒸汽灭菌的原理，并掌握其具体操作方法 分类 分类 二、实验原理 （1）微生物学常用的玻璃仪器 培养皿，试管，三角瓶（锥形瓶）、吸量管，（大小） （2）培养基的分类 按物理状态分、按组成成分分、按用途分 配置培养基时注意的事项：pH（不能回调），T （3）培养基的灭菌 培养基配置好后应立即灭菌，且不能再次灭菌 化学灭菌(甲醛，洁尔灭、升汞）， 物理灭菌（干热，紫外线等、过滤除菌）、 湿热灭菌 三、实验器材 1.药品及试剂： 2.仪器及其它 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(5.5-9.0)、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管（1ml）、玻璃珠 四、实验方法和步骤 微生物常用玻璃仪器的包扎和棉塞的制作 a.培养皿的包装每10套一包，用旧报纸包扎（或放在特制铁皮圆筒里，加盖扣严）。 b.吸管的包装首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用长纸条包扎、打结。 c.玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装。 d. 三角瓶的包扎 2. 培养基的制备与分装 成分：牛肉膏 5g 蛋白胨10g 氯化钠 5g 磷酸氢二钾 1g 蒸馏水 1000ml （1）三角瓶固体培养基的制备 a.称量按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入在瓷缸内。 （注意药品称量顺序） b. 加入定量的琼脂、水，煮沸，溶解 c.完全溶解后，补充水分，调pH值（不要调过头） d.分装置三角瓶中，注意装液量 e. 加棉塞，包扎， 高压蒸汽灭菌,121℃,0.10Mpa,20min （2）试管斜面固体培养基的制备 a.称量按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入在瓷缸内。 （注意药品称量顺序） b. 加入定量的琼脂、水，煮沸，溶解 c.完全溶解后，补充水分，调pH值 d.在培养基未融化之前，用10mL移液管快速加入试管内，每根7-8mL，塞上棉塞，包扎，灭菌，灭菌完后摆斜面。 3.培养基、无菌水、器皿的灭菌 a.将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，湿热灭菌。 b.灭菌完毕，将试管培养基搁成斜面。 c.器皿放入干热灭菌箱内，加热灭菌。 思考题 1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养菌是无菌的？ 2.加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？ 3.干热灭菌应该注意哪些事项？ 4.管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么？ 实验报告注意事项 1.上课前必须写好预习实验报告 2. 实验报告内容必须填写完整，如 实验课程，实验时间，指导教师等 3. 本次实验结束后必须记录好原始记录，由老师签完名后方可离开 4. 值日生打扫卫生 5.实验成绩占期末总评成绩的20%-30% 下一个实验 实验二、细菌的简单染色和革兰氏染色 培养基的制备程序 调配 过滤 矫正pH（7.0-7.6） 分装过滤 灭菌（121.3℃，20-30分钟） 鉴定是否有菌 放入冰箱冷藏备用 因高压之后pH值会下降0.1左右，所以矫正pH时应比所需的pH高 鉴定是否有菌可将培养基置于37 ℃培养24小时，然后观察 肉汤培养基制作方法 1.将已去筋膜及脂肪并经绞碎的鲜牛肉50克，加蒸馏水100ml，放入冰箱中过夜。 2.加热煮沸半小时