姜黄素对动脉粥样硬化家兔血管内皮功能影响.docVIP

姜黄素对动脉粥样硬化家兔血管内皮功能影响 　　[摘要] 目的：观察姜黄素对实验性动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）家兔血浆一氧化氮（NO）水平，结构型一氧化氮合酶（constitutive NOS， cNOS）活性和非对称性二甲基精氨酸（asymmetric dimethylarginine，ADMA）的影响，探讨姜黄素抗AS作用及与ADMA的相关性。方法： 38只雄性日本大耳白兔随机分为4组，即对照组（8只，喂食普通饲料）、模型组（10只，喂食高脂饲料）、低剂量姜黄素组（10只，喂食高脂饲料+100 mg·kg-1·d-1姜黄素）和高剂量姜黄素组（10只，喂食高脂饲料+200 mg·kg-1·d-1姜黄素）。于实验的第12周末测定血浆TC，LDL-C，NO，内皮素（endothelin，ET），ADMA水平，主动脉组织cNOS活力，同时留取主动脉组织行病理检查。结果：喂食高脂饲料的3组较对照组家兔血浆ADMA和ET水平浓度均有升高（P 　　[关键词]动脉硬化；非对称性二甲基精氨酸；姜黄素；一氧化氮；一氧化氮合酶 　　冠心病属祖国医学“胸痹”范畴。早在汉代张仲景就把其病因病机归纳为“阳微阴弦”，即上焦阳气不足，下焦阴寒气盛，认为乃本虚标实之证。标实当泻，尤重活血通脉，宣痹通阳治法；本虚宜补，尤其重视补益心血之不足。而内皮功能不全是动脉粥样硬化（AS）发生发展的一个重要始动因子[1]，一氧化氮（NO）、内皮素（ET）等活性物质平衡失调、内皮依赖性舒张功能受损被认为是这一过程的始动因素和中心环节。ADMA由含甲基化精氨酸残基的蛋白质在蛋白精氨酸N-甲基转移酶（PRMT）的催化作用下水解生成，能竞争性抑制NOS，使NO合成减少、活性降低，进而导致血管内皮功能障碍，是一种血管内皮功能失调的危险因子。 　　姜黄素是从姜科姜黄属植物姜黄根茎中提取的一种酸性酚类物质。研究表明，姜黄素具有抗内皮功能失调、抗氧化等作用[2-3]，可能在多个环节上影响AS的发生和发展[4]，但目前尚未明确姜黄素在AS过程中对ADMA的影响及其可能的作用机制。本研究旨在基于以上的理论与研究进展，通过建立家兔AS模型，应用不同浓度的姜黄素进行体内干预，观察姜黄素对其保护作用，并初步探讨其作用是否通过影响ADMA的产生来实现。 　　1材料与方法 　　1.1动物与药物 2～3月龄健康???性日本大耳白家兔， 体重1.7～2.1 kg，由温州医学院动物实验中心提供，浙医动字2200300002，在实验中心饲养。采用高脂饲料即89%基础饲料、10%猪油、1%胆固醇复制AS动物模型。胆固醇由上海国光生物有限公司生产；姜黄素由神威药业有限公司生产，纯度99%；NO试剂盒，NOS试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。ADMA标准品，邻苯二甲醛衍生试剂（OPA），3-巯基丙酸购于Sigma公司，高效液相色谱仪为Agilent 1100系列。鼠抗兔巨噬细胞单克隆抗体（克隆号RAM11）购于LABVISION公司。山羊抗兔二抗，BAD染色试剂盒购于上海基因公司。姜黄素为黄色粉末，实验前用0.5%羧甲基纤维素纳（CMC-Na）溶液配成10 g·mL-1的混悬液（现配现用），供家兔灌胃用。 　　1.2AS模型复制和动物分组 38只大耳白家兔给予基础颗粒饲料适应性喂养1周， 随机分为4组：正常对照组（8只）、模型组（10只）、姜黄素低、高剂量组（各10只）。对照组予喂饲正常饲料，模型组和姜黄素组给予高脂饲料喂养， 每只家兔每日进食量均为150 g，单笼喂养，饮水不限， 连续喂养12周。在喂养过程中，对照组和模型组予0.5%CMC-Na 10 mL·kg-1体重灌胃，低、高剂量姜黄素组分别给予10，20 g·L-1的0.5%CMC-Na姜黄素混悬液按10 mL·kg-1体重灌胃（即给予每千克体重100，200 mg姜黄素灌胃）。每日1次。 　　1.3取材 于高脂喂养第6周和第12周末，禁食12 h，经耳中央动脉取血备用。20%乌拉坦20 mL·kg-1腹腔注射，沿腹正中线切开，将主动脉从心脏与主动脉连接的位置及髂动脉分支处剪断，离体后纵向剪开主动脉，剥离动脉外膜，生理盐水冲洗后于胸主动脉起始端剪取1 cm血管制作组织匀浆，剩余标本予10%中性福尔马林溶液固定，待苏丹IV染色及病理检查。 　　1.4血脂和血浆NO检测 取血2 mL，标本经3 000 r·min-1离心15 min， 取血浆， 用全自动生化仪检测血脂指标。TC测定用CHOD-PAP法；LDL-C测定用直接法；采用硝酸还原酶法测定血浆NO含量，步骤严格按照说明书操作进行。 　　1.5血管组织样品cNOS活力测定 于主动脉起始处取血管组织长1 cm左右，冰生理盐水冲洗2次后，匀浆器制作10%的组织匀