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HSP47在肾小管上皮细胞转分化中的作用与机制研究 密级 分类号 博士学位论文 .’: .,: 二. 在肾小管上皮细胞转分化中的 、‖ 。吐 作用与机制研究 研 究生 :毕慧欣 学科专业:内科学√,原创性声明 本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外, 论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南 大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本 研究所作的贡献均已在在论文中作了明确的说明。 作者签名: 日期: 五墨竺 丝贮年』月上日 关于学位论文使用授权说明 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权 保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全 部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文;学校可根 据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。 作者虢聋鳖导师签名谶嗍脚』月手日中文摘要 博士学位论文 要 摘 研究背景 肾间质纤维化 ,是慢性肾脏疾病 ,进展到终末期肾脏疾病,的共同通路和最主要病理改变之一。大量动物 及临床实验表明,在各种原发和继发性。肾脏疾病中,肾间质纤维化程 度比肾小球硬化程度与肾功能的关系更为密切,是反映肾功能下降严 重程度和判断预后最重要的指标。肾小管上皮细胞转分化 ,是肾间质纤维化的早期且可逆阶段, 细胞外基质 ,沉积是肾间质纤维化的主要 , 组织学改变。研究表明转化生长因子. 一在这一过程中起关键作用。./.信号通路是 .诱导肾小管上皮细胞及沉积的主要途径。 热休克蛋白 ,是热休克蛋白家 族的一种胶原特异性分子伴侣,能与多种类型的胶原和前胶原特异性 结合,调控胶原的表达,在多种器官纤维化过程中起重要作用。研究 显示过度表达与肾脏纤维化密切相关,并成为肾脏纤维防治 的目标之一。主要表达于表型转化的肾小管上皮细胞,受 .调控,抑制表达能够减轻肾脏纤维化。肾小管上皮细 胞过程中伴有热休克蛋白亚族的产生,而热休克蛋白参与 的研究目前尚不多,基于以上分析,我们认为可能与慢性肾 脏疾病肾小管上皮细胞及沉积有关。因此,本实验从体 博士学位论文 中文摘要 内体外两方面研究肾小管上皮细胞中的作用,并进一步 阐述其可能的作用机制。 博士学位论文 中文摘要 第一章在模型大鼠中的表达及其对肾小管上皮细胞转 分化的影响 目的 阐明在模型大鼠肾小管上皮细胞及 沉积中的作用,探讨以为靶点抑制肾小管上皮细胞及 沉积的策略。 方法周龄雄性大鼠,体重、。随机分为假手术 组组、模型组组、模型超声联合脂质 微泡反义寡核苷酸 , 组组以及模型超声联合脂 质微泡正义寡核苷酸 , 组组。每组只,再随机分为天组,天组,天 组三个亚组每组只。按分组于第、和天处死大鼠,取结 扎侧肾脏。运用、染色观察各组大鼠肾脏组织形态学改变, 采用免疫组化方法检测组大鼠不同时间肾脏组织、波形 蛋白、紧密连接蛋白 .,.、型胶 , 的表达,运用 及? 原 检测各组大鼠天时各组大鼠肾脏组织、.、、 的表达。 结果和染色显示,与组相比,组大鼠 . 随梗阻时间延长,肾小管损伤程度、间质纤维化程度及炎症细胞浸润 逐渐增加.。与组相比,组上述病变程 博士学位论文 中文摘要 度较同时间组减轻.,组无明显差别 .。免疫组化显示,与组相比,组大鼠随梗阻时间的 延长肾脏组织、、 表达上调.,而. 表达下调.。与组相比,天时组 蛋白及表达明显降低.,同时.蛋白及 、 表达上调., 蛋白及表达下调 .,纤维化程度减轻;组、.、、 蛋白及表达无明显变化.。 结论模型大鼠肾小管上皮细胞及沉积过程中, 表达上调;抑制表达能部分逆转肾小管上皮细胞, 抑制生成。 关键词 肾间质纤维化,,细胞外基质,超声微泡转染, 上皮细胞间充质转分化 中文摘要 博士学位论文 第二章在肾小管上皮细胞中的表达及其对.诱导的肾 小管上皮细胞转分化的影响 沉 目的 阐明在.诱导的一细胞 积中的作用,探讨以为靶点抑制.诱导的细胞 及沉积的策略。 方法用/ .刺激细胞一组,通过 及. 检测、、 细胞免疫荧光、 .的表达,通过 及. 检测型胶原 , 和Ⅳ型胶原,的表达;转 组及阴性对照组 染 砌峪.组,阴性对照为无基因抑制效果的一段, 检测表 再予.刺激,通过细胞免疫荧光、 、. 达,通过 法检测细胞、 .、 、的表达变化。 和 结果/ .刺激后,一细胞、 蛋白及呈时间依赖性表达升高.,.蛋白及 呈时间依赖性表达降低.,而蛋白及 也呈时间依赖性表达升高.。与?组相比, 组细胞蛋白及表达明显下调.,同时 和Ⅳ .蛋白及表达上调.,、 蛋白及表达下调.;一组、 中文摘要 Ⅳ的蛋白及表达无明显变化.。 导.细胞及沉积过程中伴