细胞工程第五章 植物细胞培养与次生代谢产物生产.ppt

低温处理： 冷处理也可以提高培养体系中细胞同步化的程度。Okamura等曾采用此途径使胡萝卜悬浮细胞较好的同步化。梅兴国等（2001）采用6℃低温处理红豆杉细胞液获得较明显的同步效果。 6、 细胞系与细胞株 （1）细胞系：以一种细胞为主的，能在体外长期共存的不均一的细胞群体。 ① 细胞株：是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。 ②亚株：由原细胞株进一步分离培养培养出与原株性状不同的细胞群。 （2）适合于工业化生产的细胞株必须满足的条件：①分散性好；②均一性好；③生长速度快；④目标产物含量高，容易分离提取；⑤细胞遗传稳定。 (3)细胞株筛选 A、一般步骤 ①愈伤组织的诱导与培养； ② 单细胞分离； ③细胞无性系的分离； ④细胞株筛选； ⑤性能评价； ⑥细胞株获得 B、定向富集驯化 ①激素自养型细胞株的筛选驯化； ②耐受高剂量有毒物质的细胞株驯化； 含高浓度的乙酸盐、苯甲酸钠等可能对 细胞产生毒害。 C、人工诱变筛选 （三） 细胞的保存 1、主要的保存方法： （1）继代培养保存方法 （2）低温保存法 主要是利用在组织培养中降低培养温度，减少组织的呼吸与代谢来达到长期保存的目的。 2、冰冻保存 ①低温保存：-20 ℃保存 ②超低温保存 超低温保存：指液态氮(-196 ℃ ）中保存 、 植物组织和细胞。 （四）植物单细胞培养的意义、培养技术 1、有利于观察细胞个体的分裂、生长和繁殖、分化情况； 2、建立单细胞无性系，进行优良细胞株的选择，有利于生物转化和天然化合物的生产； 3、有利于进行细胞特性、细胞生长规律、细胞代谢过程及其调节控制规律等方面的研究。 二、植物细胞的大规模培养 （一）大规模悬浮培养技术及特点 1、成批培养/分批培养 特点： （1）培养基体积固定 （2）培养过程中，细胞生长，其数目不断发生变 化，呈S形增长。 2、分批培养细胞生长曲线及各个时期的特点 延滞期：细胞很少分裂，其长短与接种量大小和继代时细胞所处的生长期有关 对数生长期：细胞分裂活跃，细胞数目增加，增长速率保持不变 直线生长期：细胞生长和发育最明显的时期 减慢期：生长逐渐缓慢，培养液消耗将近，有毒代谢物质增多，氧气减少 静止期：生长几乎处于停止状态，细胞数目增加极少，甚至开始死亡 3、连续培养 特点：一方面以一定速率不断地加入新的 培养基，另一方面又以相同的速率流出培养物（细胞和代谢产物）。通过调节流入和流出的速度，使培养物的生长速度一直保持在接近最高值的恒定水平上。 第5章 植物细胞培养与次级代谢产物制备 主要内容： 第一节 植物单细胞培养技术 第二节 植物细胞的大规模培养 第三节 植物细胞生物反应器学习的目标与要求： 掌握植物单细胞培养及植物大规模培养的技术要点，认识培养中各个时期细胞的生长特点和各种培养方式。同时了解植物细胞培养的各种细胞生物反应器及生产次生代谢的技术要点。  （一）植物细胞培养是指在离体条件下，将分离的细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量细胞群体的一种技术。 细胞培养是在植物组织培养的基础上发展起来的，理论基础是植物细胞的单个细胞内存在生命体的全部能力（全能性）。 一、植物细胞培养 （2）植物细胞培养的培养基 主要由无机盐、碳源、有机氮源、有机酸、维生素、激素和一些复合物质组成。 （1）植物细胞培养与微生物相比有那些特点. (大、非均相细胞团方式存在、具有细胞壁和大的液泡、生长慢、防止微生物污染更困难、需要光照） （二）植物单细胞培养 1、平板培养 2、看护培养与饲养层培养 3、微室培养 4、液体浅层静置培养法 5、细胞同步化培养 1、细胞平板培养 所谓平板培养（plating cuture)： 是指将一定密度的悬浮细胞接种到一薄层固体培养基中进行培养的技术。 单细胞的分离：一般采用酶分离法，小细胞团不能超过6个细胞，因此过滤时网筛的网眼要选择合适。 1、细胞平板培养 单细胞悬浮液的制备：分离的单细胞经培养基洗涤2次以后，调整密度为5x105/mL。 植板：将1份已调整好密度的单细胞悬浮液与4份35℃的固体培养基充分混合均匀，然后均匀的平铺在培养皿中，其厚度为5mm。 平板培养的效果一般用植板率来衡量。植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。 主要技术要点是：· 单细胞的分离；· 单细胞悬浮液的制