微生物检验标本采集与接种（精品）.ppt

微生物检验标本采集与接种 内容 血培养 尿培养 痰培养 脓液 脑脊液 前列腺 STD 厌氧培养 血培养 增菌培养 商品血培养瓶 成人瓶、儿童瓶、中和抗生素瓶 无菌操作采集血标本接种到培养瓶后，轻轻混匀以防血液凝固。立即送检，切勿冷藏。 采血量成人采血量是10～20ml，儿童1～5ml。血液和肉汤之比为1:5～1:10。 35℃ 培养5-7天 血培养污染 vs. 皮肤消毒 血培养 一旦提示阳性结果，涂片行革兰染色，根据镜检结果决定转种羊血平皿及巧克力平皿上，并分别放置普通培养箱及CO2烛缸内35 ℃ ～37℃孵育培养需氧和兼性厌氧菌；转种布氏血琼脂，厌氧环境培养厌氧菌；转种沙保罗培养基，培养真菌。 将革兰染色结果立即向临床电话初级报告。 待细菌鉴定及药敏结果出来后再向临床发出最终报告。 血液培养 【特别提醒】 厌氧菌 从血液中培养出厌氧菌的比率相对比较少，不推荐每个病人常规增加一个厌氧血培养，但如果必要，选用其配套的厌氧培养基来培养厌氧菌。 营养苛刻的细菌（Fastidious Bacteria） 布鲁氏菌属可以在常规血液培养基中生长，并且尽管可以在三天内分离到，但是推荐培养21天，且有必要进行末次接种。 HACEK群细菌—嗜泡沫嗜血杆菌（Haemphilus aphrophilus）、放线共生放线杆菌（Actinobacillus actinomycemcomitans）、人心杆菌(Cardiobacterium hominis)、侵袭埃肯菌(Eikenellus corrodens)和金氏杆菌（Kingella kingae）与细菌性心内膜炎有关，常规血培养基中可以分离，但培养14天和进行肉汤末次接种会更有效。 血培养 常规血液培养基不能分离钩端螺旋体。 分枝杆菌（Mycobacteria） 使用常规血培养基不能分离。 导管头 培养导管头是为了明确细菌来源。最常用的方法是半定量的方法，方法是用5cm长的导管末端部分在血液琼脂平板上滚动4次。培养物出现15个以上的菌落，提示有潜在的导管相关性感染。 尿道感染 综合病症 尿路感染病原菌 有症状妇女的尿路感染诊断性试验 尿液革兰染色-革兰阴性杆菌 chromID CPS- 生物梅里埃公司的产品快速鉴定大肠埃希菌，变形杆菌和肠球菌 可分离所有尿道病原菌 更好的可操作性 更好的鉴定能力 更高的可靠性 尿培养 【操作步骤】 1．培养皿放置至室温，先充分摇匀尿液 2．用1μl定量接种环或用微量移液器无菌吸取10ul尿液接种于羊血平皿和MAC上，然后用无菌接种环划线涂布，置35℃，最好在5～10％co2环境下，孵育18～24小时 3．次日观察结果，根据诊断标准进行诊断，阳性结果做细菌鉴定和药敏。 尿培养 【定量标准】 用1μl接种环，结果×1000cfu/ml；用10μl接种环，结果×100cfu/ml。 菌计≥10万cfu/ml，继续鉴定和药敏。 降低标准的情况： 幼儿、儿童或男性的确定的尿路感染，其尿标本定量也可＜10万cfu/ml； 插导管的患者、最近用过抗生素者、大量喝水者、伴发脓尿和有症状者、有尿路阻塞 或由于血源性传播而患有肾盂肾炎者，其尿标本定量也可＜10万cfu/ml； 患有尿道综合征的性活跃的年轻女性，其尿标本定量也可＜100cfu/ml。 尿培养-注意事项 标本留取严格执行无菌操作。 不要将尿液标本接种于增菌肉汤培养基中。 清洁中段尿标本不要进行离心处理。 尿液标本原则上不做厌氧培养。 尿液收集后应立即送检 ，不能送检者可置4℃～8℃冰箱储藏，储存时间≤24小时。 患者应在用药前或停用抗生素后至少三天留取尿液，尿液中勿加防腐剂。 痰培养-操作步骤 取适量痰液化剂放入痰标本盒内混匀放置30分钟， 用无菌环挑2～3环标本，分区划线接种于羊血平皿或沙保培养基上、Mac置35℃孵育18～24小时,巧克力平板5％co2 35℃孵育18～24小时。 观察结果，根据细菌生长情况进行鉴定及药敏。 挑取脓液部分涂片，革兰染色镜检。判断标本是否合格。 痰培养-操作步骤 痰标本涂片染色显微镜检查的分类：判断标准 比较简单的方法就是确定鳞状上皮细胞数量：细胞数＞ 10/低倍视野，说明混有痰液。 细胞数/低倍视野 WBC ＜10 鳞状上皮细胞＞25 不合格 WBC 10～25 鳞状上皮细胞＞ 25 不合格 WBC ＞ 25 鳞状上皮细胞＞ 25 不合格 WBC ＞ 25 鳞状上皮细胞10～25 可接受 WBC ＞ 25 鳞状上皮细胞≤10 合格 WBC ≤25 鳞状上皮细胞≤25 可接受? 痰培养-特别提醒 洋葱伯克霍尔德菌 是一种重要的呼吸道致病原，可引起囊性纤维化。常规