[化学]第三章 分子荧光 光谱法.pptVIP

（1）首先，在紫外光区内，固定激发光波长（可以任意选择几个）对荧光物质进行荧光发射光谱的扫描，从而确定产生最大的荧光强度时的荧光波长λ2； （2）固定荧光波长λ2，对荧光物质进行激发光谱的扫描，确定最佳的激发光波长λ1 。 3.激发光波长λ1 和λ2的选择 §3.2 荧光(磷光)分光光度计 一. 主要组成及部件的功能 光源 氙灯 激发单色器 样品池 光电倍增管 数据处理 仪器控制 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 发射单色器 激发光源(light source) 样品池(吸收池)(absorption cell) 单色器(monochromator ) 检测器(detecor) 记录及数据处理器(display) 仪器的主要部件 能够在紫外-可见光区连续发光，用卤钨灯、氙灯、高压汞灯或激光光源. 激发光源 卤钨灯 高压汞灯 高压氙灯 样品池 紫外-可见分光光度计 (吸收池) I0 It 荧光分光光度计 样品池 I0 It IF,p 滤光片、棱镜、光栅 单色器 第一单色器——选择激发光波长λ1 （＞250nm的紫外光），称为激发单色器。 第二单色器——选择(测量)发射光（荧光）波长λ2, 与激发光入射方向垂直，称为荧光单色器。 检测器 光电池或光电倍增管, 光电二极管阵列式检测器 问题：荧光分光光度计与紫外-可见分光光度计有何异同点？ 紫外-可见分光光度计: 光源 样品池 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 荧光(磷光)分光光度计: 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 特点： （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级； 检测下限：0.1～0.1?g/cm-3 3.3 荧光分析方法与应用 荧光辐射的波长比激发光波长长，测量到的荧光频率与入射光的频率不同； 荧光在各个方向上都有发射，因此可以在与入射光成直角的方向上检测； 荧光分析的灵敏度不仅与溶液的浓度有关，而且与紫外光照射强度及荧光分光光度计的灵敏度有关，测量用的样品量很少，且测量方法简便。 ②选择性好 凡是会发生荧光的物质首先必须会吸收一定频率的光，但会吸收光的物质却不—定会产生荧光。对于某一给定波长的激发光，产生荧光的物质发出的荧光波长也不相同，只要控制荧光分光光度计中激发光和荧光单色器的波长便可得到选择性良好的方法． ③应用范围小 能够引起荧光的化学物质较少大多数物质本身不会产生荧光, 一些物质在加入某种试剂后能够产生荧光。 一、定性分析 荧光物质的特征光谱包括激发光谱和荧光光谱，因此用它鉴定物质比吸收光谱可靠。 定性方法：将特征光谱的形状、波长范围与标准品对照，看是否一致。 F－F0 c Fx －F0 cx 二、定量分析 1.标准曲线法： 2. 直接比较法 如果荧光物质的标准曲线过零点，且线性良好，可用直接比较法测定。在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，进行比较： 三、荧光分析法的应用 （1、 有机物的荧光分析 无机物能够直接产生荧光并用于测定的很少。可通过与荧光试剂作用生成荧光配合物、或通过催化或猝灭荧光反应进行荧光分析。非过渡金属离子的荧光配合物较多。可用于荧光分析的元素已近70种。 荧光试剂是具有两个或以上与MZ+形成螯合物的电子给予体官能团的芳香结构。 2、 无机元素的荧光分析 OH N SO3Na N=N OH HO ON 8-羟基喹啉 石榴茜素R 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定。 荧光成像 Cell Cell 标记抗体的荧光纳米颗粒 被识别的目标细胞 目标细胞 3、在生命科学中的应用 分子信标 具有单碱基错配识别能力的分子信标探针，可以用于检测单细胞内基因的表达、突变等 知识拓展—新型荧光材料 荧光量子点、荧光纳米簇、荧光聚合物点 1. 下列说法哪个是错误的？ ( ) 荧光光谱的最短波长和激发光谱的最长波长相对应 (2) 最长的荧光波长与最长的激发光波长相对应 (3) 荧光光谱与激发光波长无关 (4) 荧光波长永远长于激发光波长 21. 分子荧光过程是 ( ) (1) 光致发光(2) 能量源激光发光(3) 化学发光(4) 电致发光 32. 在荧光光谱中, 测量时, 通常检测系统与入射光的夹角呈 ( ) (1) 180°(2) 120°(3) 90°(4)