[理学]分子荧光光度法.pptVIP

第三节 荧光定量分析 Quantatitive Analysis 一、基本原理 在稀溶液中，荧光强度 If 有： If = K · c 二、定量分析方法 1. 工作曲线法 常将标准系列溶液中浓度最大的标准溶液做基准，使其荧光强度读数为F0(100), 然后测出其它溶液的相对荧光强度 以（I - I0）对 C标作图，测出 Ix ，查（ Ix - I0）找对应 Cx 。 C标 Cx （I - I0） （ Ix - I0） 2. 标准对照法 （ Is – I0 ）= K · Cs （ Ix – I0 ）= K · Cx 第四节 仪器与技术 Fluorometer 测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 1. 激发光源 2. 单色器 光电荧光计常用干涉滤光片，荧光分光光度计常用光栅。 特点：强度大、适用波长范围宽 常用：高压汞灯、氙弧灯、卤钨灯、 激光光源 仪器光路图 3. 样品池 用石英材料，四面透明 4. 检测器 光电池或光电倍增管 激发单色器：把不需要的光线滤去，让所选择的激发光透过而照射在测定物质上。 选最大激发波长 λex 荧光单色器：把激发光所发生的反射光、溶剂的散射光以及溶液杂质所产生的荧光滤去