生化技术_ppt课件 第一章 生命大分子物质的制备课件.pptVIP

第一章 生命大分子物质的制备;生物大分子?(biomacromolecule); 在自然科学，尤其是生命科学高度发展的今天，蛋白质、酶和核酸等生物大分子的结构与功能的研究是探求生命奥秘的中心课题。生物大分子结构与功能的研究，必须首先解决生物大分子的制备问题，没有能够达到足够纯度的生物大分子的制备工作为前题，结构与功能的研究就无从谈起。 生物大分子的分离纯化与制备是一件十分细致而困难的工作。 ;生物大分子的制备有以下主要特点：;;①在水和各种有机溶剂中的溶解性。 ②在不同温度、pH值和各种缓冲液中生物大分子的稳定性。 ③各种物理性质：如分子的大小、穿膜的能力、带电的情况、在电场中的行为、离心沉降的表现、在各种凝胶、树脂等填料中的分配系数。; ;蛋白质的理化性质; 目前纯化蛋白质等生物大分子的关键技术是电泳、层析和离心三大技术。;材料的选择与处理; 制备生物大分子，首先要选择适当的生物材料。材料的来源无非是动物、植物和微生物及其代谢产物。所选用的材料主要依据实验目的来确定。 选择的材料应含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。;;例一：;例二：; 材料尽可能保持新鲜，尽快加工处理，以防有效成分降解、破坏，必要时可冷冻、干燥处理。 1、动物组织 必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料，先进行绞碎、脱脂等处理后在适当的溶剂中提取，如果所要求的成分在细胞内，则要先破碎细胞。 ;;2、植物材料 必须清洗,去壳，脱脂，并注意植物品种和生长发育状况不同，其中所含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关系密切。 如 叶片:直接洗净 植物种子:泡胀或粉碎 ; 3、微生物：种类多，繁殖快、培养简便、易诱变、不受季节的影响，是常用的材料。 应注意它的生长期。在微生物的对数生长期，酶和核酸的含量较高，可以获得高产量。以微生物为材料时有两种情况： （1）微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等 （2）菌体含有的生化物质，如蛋白质、核酸和胞内酶等;另外，对预处理好的材料，若不立即进行实验，应冷冻保存； 对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备； ;第二节 ;一、目的与要求;分析测定的方法主要有两类： 即生物学和物理化学的测定方法。 生物学的测定法主要有：酶的各种测活方法、蛋白质含量的各种测定法、免疫化学方法、放射性同位素示踪法等；;物理、化学方法主要有：比色法、气相色谱和液相色谱法、光谱法（紫外／可见、红外和荧光等分光光度法）、电泳法、以及核磁共振等。 实际操作中尽可能多用仪器分析方法，以使分析测定更加快速、简便。;1、光谱法;紫外光谱法;芳香族氨基酸的紫外吸收;;可见光光谱法;; 利用有些生命大分子物质自身可以吸收特定光波的能量后，发出荧光的特性而建立的一种方法。 精确性 重复性 灵敏度 比吸收光谱法好;浊度法;光谱法 电化学法 生物活性检测法 免疫分析法 生物传感器;第三节;;一、机械破碎;;二、物理法：;;;三、化学与生物化学方法：;3.有机溶剂处理法：利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性溶剂或SDS（十二烷基硫酸钠）等表面活性剂处理细胞，可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂，此法也可以与研磨法联合使用。 4.酶解法：利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶和酯酶等，于37℃，pH8，处理15分钟，可以专一性地将细胞壁分解。 ;第四节;一、抽提;提取时所选择的条件应有利于目的产物溶解度的增加和保持其生物活性。 影响提取的因素主要有： 目的产物在提取的溶剂中溶解度的大小； 由固相扩散到液相的难易； 溶剂的pH值和提取时间等。;二、抽提有效成分的影响因子;1) pH值：;2) 溶剂的极性和离子强度：;;3)水解酶：; 加入二异丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或减慢自溶作用； 加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性； 加入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力； 还可通过选择pH、温度或离子强度等，使这些条件都要适合于目的物质的提取。;4) 温度：;5)搅拌：;6) 氧化：;第五节;1.沉淀法:;2.吸咐法: ;3.超滤:; 关键在于膜的选择，不同类型和规格的膜，水的流速，分子量截止值（即大体上能被膜保留分子最小分子量值）等参数均不同，必须根据工作需要来选用。;4.透析法: ;半透膜阻留蛋白质分子，而让小的溶质分子和水通过，以达到除去蛋白质溶液中小分子（盐、低分子酸等）。;5.蒸馏法:;6.空气流动蒸发浓缩:;7.冰冻干燥法:; 在低温低压下，冰很易升华为气体。操作时一般先将待干燥的液体冷冻到冰点以下使之变成固体，然后在低温低压下将溶剂变成气体而除去。此法干