微生物实验室培养（二）.docVIP

微生物的实验室培养(二) [目标导读] 1.掌握配制培养基的步骤和倒平板操作的过程。2.理解并掌握利用平板划线法和稀释涂布平板法来纯化微生物的方法。 [重难点击] 1.掌握制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法。2.学会用平板划线法和稀释涂布平板法纯化微生物。 一 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 牛肉膏蛋白胨固体培养基是细菌培养中常用的一种培养基，大肠杆菌的纯化就是用的该培养基。 1.牛肉膏蛋白胨固体培养基的成分及各成分提供的营养 培养基组分提供的主要营养物质牛肉膏5.0 g蛋白胨10.0 g________和维生素NaCl 5.0 g蒸馏水定容至1 000 mL氢元素、________元素 2.实验过程 (1)培养基的配制 计算：根据牛肉膏蛋白胨培养基________的比例，计算配制100 mL培养基时各成分的用量 ↓ 称量EQ \* jc0 \* Font:宋体 \* hps21 \o(\s\up 9(0.5 g NaCl),2 g　　　　) ↓ 溶化EQ \* jc0 \* Font:宋体 \* hps21 \o(\s\up 9(　　↓),熔化后，补加蒸馏水至　　　　 mL) ↓ ：1 moL的NaOH、pH试纸，将pH调为7.4 ～7.6, ↓ ________：趁热分装到洁净锥形瓶中 ↓ 加棉塞：用棉花不用脱脂棉，脱脂棉吸水, ↓ 包扎：外包________纸，且挂标签 (2)灭菌EQ \* jc0 \* Font:宋体 \* hps21 \o(\s\up 9(①培养基：　　　　灭菌),②培养皿：　　　　灭菌) (3)倒平板 待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行操作： ①在火焰旁________手拿锥形瓶，________手拔出棉塞(如图1)。 ②使锥形瓶的瓶口迅速通过________，目的是进行________，防止瓶口微生物污染培养基(如图2)。 ③________手将培养皿打开________________，________手将培养基倒入培养皿，立刻盖上________(如图3)。 ④等待平板________________后，将平板____________放置(如图4)。 3.培养基的选择：培养基配制好后，要放在____________中保温1～2 d，若________________则说明制备的培养基是合格的。 4.平板倒置的原因：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基__________________，又可以防止____________________。 归纳提炼培养基的配制原则 (1)目的要明确(根据微生物的种类、培养目的等)，如生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。 (2)营养要协调，注意各种营养物质的浓度和比例。 营养物质浓度过低不能满足微生物的营养需求，过高对微生物的生长有抑制作用，另外，培养基中各营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。例如，在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为4∶1时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳源与氮源的比为3∶1时，菌体繁殖受到抑制，但谷氨酸合成量大增。 (3)pH要适宜，各种微生物适宜生长的pH范围不同，细菌6.5～7.5、放线菌7.5～8.5、真菌5.0～6.0。 活学活用 1.下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是( ) 操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C.待培养基冷却至50 ℃左右时进行倒平板 D.待平板冷却凝固约5～10 min后，将平板倒过来放置 2.下列叙述错误的是( ) A.右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近 B.倒平板整个过程应在酒精灯火焰旁进行 C.打开培养皿皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 D.为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置 二 纯化大肠杆菌 纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由______________________繁殖而来，这就需要接种时尽量接种单个的大肠杆菌，最常用的是_________法和_____________法。 1.平板划线法 (1)原理：通过____________在琼脂固体培养基表面________________的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 (2)结合示意图，完成下面步骤： 操作 示意图操作将____________放在酒