13年度临医免疫学试验课下.pptVIP

二、胸腺细胞的制备： 眼球摘除放血颈椎脱臼处死小鼠，无菌条件下取胸腺，置入含5%小牛血清的预冷RPMI-1640培养液中，先用不锈钢网研磨，再将研磨好的细胞悬液用250目尼龙滤布过滤，1000 rpm离心4 min，调整细胞浓度为1x107/ml。取上述1x107/ml浓度的胸腺细胞加入终浓度为1x10－5 M的地塞米松，培养5 h即为凋亡阳性细胞，不加地塞米松为对照组。（去上清，沉淀细胞加1ml 1640 混匀备用）。 三、小鼠胸腺细胞DNA快速提取 小鼠胸腺细胞（细胞浓度107/ml） （诱导组和未诱导组） EP管(1.5ml) 弃上清 充分混匀后，55 ℃温浴20分钟。 12000转/分，10秒 20ml A液和 100ml L液 加入10μl3MNaAc和1250μlB液充分振荡混匀后离心12000转3分钟 期间颠倒EP管五次 移取700ml至吸附柱中,静止1分钟，离心30s。弃去收集管中的液体，重复上述操作。 加入600μlW液离心30s。弃去收集管中的液体，重复上述操作，再离心1次 将吸附柱移入一个干净的EP管中(1.5ml)中。在吸附膜的中央加入50ml T液，静置1分钟后， 12000转，离心1分钟。取出EP管(其中便是收集的DNA)－20 ℃保存、备用。 一.细胞裂解阶段(L液=裂解液,RNaseA/蛋白酶K=A液) 二.结合DNA阶段(B=结