RTCA技术原理及应用9LJxQ.pptx

xCELLigence技术的原理及其应用简介郑 敏杭州高通量新药筛选中心浙江大学医学院附属一院xCELLigence技术介绍大纲简介传统基于细胞水平的研究方法的局限性ACEA公司的解决方法技术平台:基于微电子传感器技术，通过实时监测阻抗的变化来进行实时的细胞分析操作原理:实时细胞分析我们监测的指标xCELLigence 系列产品RTCA检测的特点应用范例独特的应用：RTCA心脏系统总结: RTCA技术的优势传统细胞毒性/活力检测方法工作原理及检测流程细胞培养MTTCVKT加入MTT加入CVTK孵育孵育加入有机溶剂单个时间点信息结果反复，不稳定新的未知蛋白/药物/基因的作用 难以优化条件耗费大量时间，经费重复实验，优化条件没有直观信息做问题分析孵育测吸光度数据处理分析RTCA实时动态监测细胞毒性反应检测流程细胞增殖细胞效应细胞接种外界因子加入MTT RTCA DNA DamagingDNA Damaging实时无标记全自动细胞毒实验-传统终点 VS 实时无标记检测标记终点检测药物处理 细胞接种传统终点检测数据分析1-24 小时Black Box细胞接种药物处理 RTCA实时无标记检测数据分析自动实时动态检测及数据分析微电子阻抗感应器在细胞生物学中的应用electrodes attachedwith cells检测原理基于微电子阻抗技术的细胞检测技术Add CellsZZelectrodeswithout cellsZ = Z0Z = Zcell细胞指数和细胞数的关系Cell Number16000 4000 2000 8000 8.3Cell Index125 Cell Number1000 500 250 Cell Index0.53细胞指数和细胞粘附力及形态的关系0 min5 min20 minxCELLigence系统系列产品RTCA 6*96RTCA 1*96RTCA3*16CIMRTCARTCA Cardio InstrumentRTCA HT SystemRTCA 1*384xCELLigence系统系列产品的匹配电子板TreatmentTreatment时间点选择在细胞试验中重要性 不同的细胞状态对于处理因素有不同的反应 RTCA系统使接种细胞后的对于细胞的检测可持续进行 RTCA 为最佳处理时间的选择提供了依据Vehicle33 nM67 nM100 nM150 nM230 nM340 nM500 nM不同时间点肿瘤细胞对抗肿瘤药物的反应性Traditional Cell Analysis MethodRT-CA AssayVehicle33 nM67 nM100 nM150 nM230 nM340 nM500 nM xCELLigence 系统的应用细胞增殖和细胞毒性试验细胞贴壁和铺展受体-配体间相互作用RTKsGPCRsIgE receptor NK细胞介导的杀伤肿瘤细胞肿瘤细胞的迁移和侵袭siRNA 文库筛选心脏细胞功能和毒性监测病毒CPE及中和实验的监测细菌毒素介导的细胞病变的监测……利用 xCELLigence 系统进行细胞质控A549PC3“HeLa” 细胞生长曲线来源于4个不同的实验室和ATCCLab 1*ATCCLab 2*Lab 4Lab 3* These labs were from the same institute应用 xCELLigence 系统研究TCRPStaurosporine5-FluorouracilTime dependent cellular Response Profiling，TCRP时间依赖的细胞反应特征性图谱TCRP with Known MechanismsShort-Term ResponseLong-Term ResponseAnti-HistamineAnti-mitoticsProtein-SynthesisNuclear HormoneDNA DamagingSerotonin Receptor AntagonistL-Type Voltage-gated Ca Channel InhibitorHDAC InhibitorsShort-Term ResponseLong-Term ResponseAnti-HistamineAnti-mitoticsProtein-SynthesisNuclear HormoneDNA DamagingSerotonin Receptor AntagonistL-Type Voltage-gated Ca Channel InhibitorHDAC InhibitorsTCRP with Known MechanismsE-PlateAddCompoundAddCellsMonitor48 hoursMon