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一、　获取目的基因 1.基因的“剪刀”──限制性内切酶（限制酶） 　　一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA分子切断。 专一性（eg：EcoRI限制酶） GAGACTGATTGGCCTTAAGCTCGAG CTCTGACTAACCGGAATTCGAGCTC GAGACTGATTGGCCTTAA CTCTGACTAACCGG GCTCGAG AATTCGAGCTC 除了某些病毒以外，限制性内切酶只在原核生物中发现 识别位点和切割位点 GATCC G G CCTA GGA CCT TCC AGG 黏性末端 平末端 3、基因的运输工具——运载体 常用的运载体：质粒、噬菌体和动植物病毒 标记基因，便于进行检测。 　　运载体必须同时满足三个要求：①能与目的基因结合；②能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；③比较容易得到。 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 第二步、目的基因与运载体结合 　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 目的基因 质粒 基因的针线──DNA连接酶 　　连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 重播 导入 扩增 第三步：将目的基因导入受体细胞 导入 扩增 常用的受体细胞：菌类和动植物细胞 Eg：可以分泌人胰岛素 的细菌 第四步、目的基因的表达和检测 　　大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 　　 第一课时知识点： 基因工程的概念 基因工程的基本步骤（四步骤） 目的基因的运载体有哪些？ 质粒（存在于细菌和酵母菌中）、噬菌体、 动植物病毒 基因的剪刀、针线分别是？ 限制性核酸内切酶（200多种）、DNA连接酶 一、基因工程与作物育种 抗虫害的玉米 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 获得高产、稳产和具有优良品质的农作物和具有抗逆性的作物新品种。 抗虫的基因来自苏云金杆菌。苏云金杆菌形成的伴胞晶体是一种毒性很强的蛋白晶体，能使棉铃虫等鳞翅口害虫瘫痪致死。科学家将编码这个蛋白质的基因导人作物，使作物自身具有抵御虫害的能力。 生长快、肉质好的转基因鱼(中国) 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷)