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第一部分 紫外-可见吸收光谱法的原理第二部分 紫外-可见分光光度计构造与类型第三部分 紫外-可见分光光度计的应用第四部分 紫外-可见吸收光谱分析的条件和影响因素第五部分 T6紫外可见分光光度计使用操作规程 第一部分 紫外-可见吸收光谱法的原理 一、基本原理:光的选择性吸收 分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁，而产生了相应的吸收光谱。属分子吸收光谱。 紫外-可见吸收光谱分析是研究物质在紫外-可见光波下的分子吸收光谱的分析方法。 紫外-可见区可细分为： （1）10-200nm；远紫外光区 （2）200-400nm；近紫外光区 （3）400-800nm；可见光区 二、Lambert－Beer定律： 2.摩尔吸光系数:(A＝KCL) (1) k与入射波长、溶液的性质以及温度有关。 （2）吸收物质在特定波长和溶剂条件下的特征常数； （3）不随浓度c 和光程长度L的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，k仅与吸收物质本身的性质有关； （4）是物质吸光能力的量度，可作为定性鉴定的参数； （5）同一物质在不同波长下的 k 值是不同的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数，常以 kmax表示。K max表明了该吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。 （6）kmax越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。 （7）k在数值上等于浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。 第二部分 紫外—可见分光光度计 一、紫外-可见分光光度计的基本构造 基本构造主要由 1.光源 在整个紫外光区或可见光区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区常用的光源是钨灯或碘钨灯，波长范围是350-1000 nm。 在紫外区常为氢灯或氘灯，发射的连续波长范围是180-360 nm。 3.吸收池 用于盛装试液的装置。吸收材料必须能够透过所测光谱范围的光。一般可见光区使用玻璃吸收池，紫外光区使用石英吸收池。 规格有0.5、1.0、2.0、5.0cm 等。 在高精度的分析测定中（紫外区尤其重要）吸收池要挑选配对，因为吸收池材料的本身吸光特性以及吸收池的光程长度的精度等对分析结果都有影响。 二、紫外-可见分光光度计的分类及特点 (一)按仪器使用波长分类： ①真空紫外分光光度计（0.1-200 nm）； ②可见分光光度计（350-700 nm）； ③紫外-可见分光光度计（190-1100 nm）； ④紫外-可见-红外分光光度计（190-2500 nm）； （二）按仪器使用的光学系统分类： ①单光束分光光度计； ②双光束分光光度计 ③双波长分光光度计 ④动力学分光光度计 （１）单光束分光光度计 经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。 简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。 （２）双光束分光光度计 经单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两束光，一束通过参比池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。 自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。 （三）紫外-可见分光光度计主要技术指标 1.光度准确性：吸光度、透射比。 2.光度重复性：又称光度精密度。 3.杂散光：表示单色光的纯度，这与制作单色器的材料和加工工艺有关。 4.光度的测量精度：表示仪器每次测定显示读数的精确度，即仪器能准确读小数点后几位。位数越多，仪器精度越高，这与仪器使用的检测系统有关。 5.光度测量的重现性：每次A读数的重现性，这与仪器使用的检测器的质量有关。 6.分辨率：表示仪器分辨吸收光谱微细结构的能力，即指仪器对于紧密相邻的峰可分辨的最小波长间距，这是衡量仪器性能的一个综合指标。 第三部分 紫外-可见吸收光谱法的应用 一、定性分析 通常根据吸收光谱的形状、吸收峰的数目以及最大吸收波长的位置和相应的摩尔吸收系数进行定性鉴定。 一般采用比较光谱法：即在相同的测定条件下，比较待测物与已知标准物的吸收光谱曲线，如果它们的吸收光谱曲线完全等同，则可认为是同一物质。