MicroRNA―218miR―218在肾透明细胞癌中表达及临床意义.docVIP

MicroRNA―218miR―218在肾透明细胞癌中表达及临床意义 　　[摘要] 目的 研究miR-218在肾透明细胞癌中的表达及其与临床病理之间的关系。方法 收集2012年3月―2013年5月间在该院就诊的46例病理确诊为肾透明细胞癌组织和30例癌旁≥3.0 cm正常肾组织作为对照组，采用Realtime PCR方法检测microRNA-218在肾透明细胞癌组织和癌旁≥3.0 cm正常肾组织的表达，分析microRNA-218表达水平与肾透明细胞癌临床病理参数之间的关系。结果 与对照组癌旁正常肾组织相比， miR-218在肾透明细胞癌组织的的表达明显降低 （P　　[关键词] 肾透明细胞癌（RCCC）； miR-218； 侵袭； 转移 　　[中图分类号] R737.11 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）04（b）-0020-02 　　[Abstract] Objective To investigate the expression of miR-218 in renal clear cell carcinoma and its relationship with clinical pathology. Methods The renal clear cell carcinoma tissue of 46 cases of patients diagnosed with renal clear cell carcinoma in our hospital from March， 2012 to May， 2013 were selected and 30 cases of normal renal tissues ≥ 3.0cm adjacent to carcinoma as the control group. Realtime PCR method was used to detect the expression of microRNA-218 in renal clear cell carcinoma tissue and normal renal tissue ≥ 3.0cm adjacent to carcinoma. The relationship between the expression of microRNA-218 and renal clear cell carcinoma clinicopathological parameters was analyzed. Results Compared with the control tissues， miR-218 expression in the RCCC tissues was significantly lower （P 　　1 资料与方法 　　1.1 标本收集 　　收集河南科技大学第一附属医院的46例肾细胞癌癌组织及30例癌旁≥3.0 cm正常肾组织作为对照组。所有组织标本均经病理学诊断确认为肾细胞癌。其中肾细胞癌中，低分化11例，中分化17例，高分化18例，根据TNM分期，临床Ⅰ期21例， 临床Ⅱ期13例，临床Ⅲ期8例 临床Ⅳ期4例 ，有淋巴结转移的14例，无淋巴结转移的32例，患者年龄28～80岁，平均年龄53.6岁 ，其中男性31例，女性15例。 　　1.2 RNA提取和 qRT-PCR 　　选用美国Invotrogen公司的RNA提取试剂盒，抽提组织总RNA。用紫外分光光度计于 260 和280 nm 波长处测定 RNA 提取液的吸光度（D）值，检测 RNA 纯度和浓度。用Invitrogen公司NCode miRNA First-Strand cDNA Synthesis 和 qRT-PCR Kits进行加PolyA尾巴和反转录。操作程序为将消化后RNA 10 μL 、5×反转录缓冲液 4 μL、25 mmol/LMnCl2 2 μL、2 mmol/L ATP 1 μL、Poly A Polymerase 0.4μL、用DEPC 处理后的无酶水补至 20 μL，放置37 ℃15 min， 再取加Poly A后RNA 8 μL、Annealing Buffer 1 μL、 Universal RT Primer（25uM）3 μL，65 ℃孵育5 min，迅速冰浴2～10 min，短暂离心，继续向以上反应液中加入2xFirst Strand Buffer 10 μL、SuperScriptⅢ RT/RNaseOut Enzyme mix 2 μL轻轻吸打混匀，50 ℃孵育50 min。反应结束后 85 ℃保温5 min。 　　使用罗氏公司的7 500型荧光定量PCR仪，采用2-△△CT法进行数据