出现血清胆汁酸增高.PPTVIP

血清总胆汁酸的检测 酶比色法测定总胆汁酸 循环法测定胆汁酸 酶比色法测定总胆汁酸 【原理】 在3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)作用下，各种胆汁酸C3上α位的烃基(3α-OH)脱氢形成碳基(3α=O)。同时NAD还原成NADH。随后，NADH上的氢由黄递酶催化转移给碘化硝基四氮唑(INT)，产生红色的甲臢。甲臢的产量与总胆汁酸(TBA)成正比，在500nm波长比色。反应式如下： 3α-羟基胆酸 + NAD+ 3-氧代胆酸 + NADH + H+ NADH + H+ + INT NAD+ + 甲臢 (红色) 酶比色法测定总胆汁酸 【试剂】 1．试剂Ⅰ 黄递酶 1 000U，NAD+ 1 mmol，碘化硝基四氮唑(INT)0.5 mmol, 丙酮酸50 mmol溶于0.1mol pH 7.5 的磷酸缓冲液1 L中，加表面活性剂适量。 2．试剂Ⅱ 3α- 羟类固醇脱氢酶(3α-HSD) 2 000U溶于0.1mol pH 7.5的磷酸缓冲液中1 L中。 3．终止液 1 mol/L HCl。 4．标准液(50μmol/L) 24.38 mg甘氨胆酸溶于1 L经透析的混合血清中。 酶比色法测定总胆汁酸 【操作步骤】 1．手工法按表 加入物(ml) 测定 测定对照 标准 标准对照 血清