复发性外阴阴道假丝酵母菌病阴道局部细胞因子水平.docVIP

复发性外阴阴道假丝酵母菌病阴道局部细胞因子水平 　　摘要：目的 通过检测阴道局部IFN-γ、IL-10的水平，探讨阴道局部免疫功能与复发性外阴阴道假丝酵母菌病发病的关系。方法 选取妇科就诊及体检的育龄妇女，健康妇女28例、VVC 30例、RVVC 30例，留取阴道灌洗液离心，ELISA法检测上清液中IFN-γ和IL-10的浓度，RT-PCR法检测细胞成分中IFN-γ、IL-10mRNA的表达水平。结果 ①RVVC、VVC、健康组IFN-γ蛋白水平为：1.67±0.14、1.81±0.16、1.92±0.12×100pg/ml，患病两组的表达水平均低于对照组（P0.05），mRNA的表达与蛋白水平一致。结论 外阴阴道假丝酵母菌病的发病和复发可能与阴道局部细胞因子水平表达异常有关。 　　关键词：复发性外阴阴道假丝酵母菌病；IFN-γ；IL-10；ELISA；RT-PCR 　　外阴阴道假丝酵母菌病（Vulvovaginalcandidiasis, VVC）是一种常见的女性生殖道感染疾病，75%的女性一生至少患过一次VVC[1]。1年中发作4次及以上有症状的VVC称为复发性外阴阴道假丝酵母菌病（Recurrentvulvovaginalcandidiasis, RVVC）。本研究通过测定患者阴道灌洗液中干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-10（IL-10）的水平，探讨其在VVC和RVVC发病机制中的作用，以期为该病的病因学和免疫治疗方面提供参考依据。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料选取妇科就诊及体检的育龄非妊娠妇女为研究对象，按疾病类型分为健康组，VVC组和RVVC组，所有研究对象无内外科疾病及免疫缺陷病，6个月内未服用甾体类激素，1w内无性生活及阴道用药史。妇科检查除VVC外无其他生殖道感染疾病、无阴道出血。 　　1.2 标本采集5ml生理盐水冲洗宫颈管、阴道上段，后穹窿回抽4~5ml，所有灌洗液均不含血液成分，以3000r/min 离心5min，分离上清液和细胞成分，分别置于-20℃和-80℃的冰箱冻存。 　　1.3 方法上清液采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定，细胞成分采用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）法半定量测定。 　　1.3.1 引物的设计与合成通过Gene Bank 查询基因序列，IFN-γ上游引物5，-GAGGTCGAAGAGCATCCCAG-，下游引物5，-GCTTAGGTTGGCYGCCTAGT-3，；IL-10上游引物5，-ACATCAAGGCGCATGTGAAC-3，，下游引物5，-GCCACCCTGATGTCTCAGTT-3，。 　　1.3.2 RT-PCR步骤Trizol提取细胞成分的RNA，按反转录试剂盒进行cDNA合成，反应条件为42 ℃，50 min；用RotorGene 3000 PCR仪进行扩增，反应条件：95 ℃，15 s； 59 ℃，25 s；共45个循环。实验结果应用分析软件Rotor-Gene计算出2-ΔΔCt值即mRNA的相对含量，每组实验重复3次，取平均值。 　　1.4 统计学分析所得数据采用SPSS 17.0统计软件包进行分析，计量资料用均数+标准差（x+s）表示，组间差异的比较采用方差检验。 　　2 结果 　　2.1 细胞因子的蛋白水平表达RVVC、VVC、健康组IFN-γ蛋白水平分别为：1.67+0.14、1.81+0.16、1.92+0.12×100pg/ml，患病两组的表达水平均低于对照组（P0.05）。 　　2.2 细胞因子的基因水平表达RVVC、VVC、健康组IFN-γmRNA分别为：0.44±0.22、0.83±0.23、1.00±0.00，患病两组的表达水平均低于对照组（P0.05）。 　　3 讨论 　　近些年来，随着对RVVC宿主免疫机制研究的逐渐深入而相对于全身免疫而言，更多的研究结果表明局部免疫异常在RVVC发病中起到重要作用，如临床研究发现RVVC患者对其它粘膜假丝酵母菌病的易感性并不增加，另外口腔或皮肤粘膜患有假丝酵母菌病的妇女并不易患VVC，因此阴道局部细胞免疫功能的变化可能在RVVC发病中发挥重要作用[2]。正常情况下，妇女阴道局部辅助性T细胞1（Th1）/辅助性T细胞2（Th2）处于动态平衡状态，它们各自分泌多种细胞因子，形成复杂的网络，共同调节免疫应答。Th1分泌IL-2、IFN-γ和肿瘤坏死因子等，主要介导细胞免疫，可激活巨噬细胞和中性粒细胞，使机体进入抗真菌状态；Th2分泌IL-4、IL-10和IL-13等，通过抑制Th1介导的噬菌作用增加对真菌的易感性。这两种细胞的相互协调决定了机体对真菌的感染性或真菌在粘膜表面的共栖状态[3]。Th1和Th2免疫应答之间存在着负反馈作用，一旦平衡被打破，会出现一方占优势的局面，会引起局部