超低温冷冻保存种质.pptVIP

a、快速冷冻法：要求细胞体积小、细胞质浓厚、含水量低、液泡化程度低的材料。 b、慢速冷冻法适宜保存的材料有成熟的、含有大液泡和含水量高的细胞，对于保存在悬浮培养中的细胞特别有效。 * 预冷冻法：可使保存材料细胞内充分脱水，避免因细胞内结冰而导致不可逆伤害的出现。干燥冷冻法：可防止材料冻死。如果将细胞在真空下脱水，植物器官液氮保存后的存活率就更高了。不同植物和不同组织的最适脱水程度各不相同 * 诱导茎尖并让茎尖培养物在黑暗(4℃)下锻炼(b)茎尖分离后用海藻酸钙包埋(c)将茎尖置于培养皿中，在超净工作台上干燥处理(d) 被包埋的茎尖在含高浓度蔗糖的培养基上预培养(e)茎尖置于冷藏管中，浸入液氮(f)化冻处理(g)植株再生，这种方法可以一次处理较多材料 * 玻璃化指的是液体转变为非晶体的固化过程。当抗冻剂溶液浓度为40～60％时，较容易形成玻璃态。有的材料只能用玻璃化发才能保存成功，显示出很大的优越性。还可以和包埋发结合使用，叫做包埋玻璃化法 * 超低温保存效果与化冻速度有密切关系，不同的材料应采取不同的化冻方式 － 大多数可采用快速化冻的方法。液泡小、含水量少的细胞采用慢速化冻法如木本植物的冬芽。 * 经冻存的材料会不可避免地受到不同程度的伤害。冻存的材料一般在黑暗或弱光下培养1～2周，在转入正常光下培养。经超低温保存后的材料存活率一般较低。建立茎尖分生组织培养物的超低温