口腔咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒操作方法与步骤说明书.docVIP

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:// 5 - 0 -◆ TRIpure Reagent 抽提指南◆ 目录号 RP02◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外◆ TRIpure Reagent 抽提指南◆ 目录号 RP02◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外◆ TRIpure Reagent 抽提指南◆ 目录号 RP02◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外口腔/咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN30目录编号包装单位DN300150次适用范围：适合于从口腔/咽拭子中分离纯化基因组DNA。试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存50次裂解液ML室温20 ml结合液CB室温20 ml抑制物去除液IR室温25 ml漂洗液WB室温15ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇Poly Carrier -20℃200μl 洗脱缓冲液EB 室温15 ml蛋白酶K粉（可选） 20mg/ml-20℃20 mg吸附柱AC和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果储存事项：结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存。避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。产品介绍：本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从口腔/咽拭子中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。典型产量0.5μg-3.5μg/拭子。产品特点：不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。配备了Poly Carrier 用于充分收集特别微量DNA。 多次柱漂洗确保高纯度，提取的DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。注意事项：所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。结合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。Poly Carrier：Poly Carrier 使用方法：如果起始处理量很少（口腔咽拭子上收集到的细胞很少），我们推荐使用Poly Carrier，如果预期有较大量DNA产量，用户可以根据需要选择是否加入PolyCarrier。使用时在每个样品提取所需400μl结合液CB 中加入4μl Poly Carrier，将结合液CB 与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可(结合液CB容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量，在总共需要的结合液CB中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!取样：取一根医用消毒棉签（手不要碰触脱脂棉部位），伸进口腔，紧靠脸颊内侧来回刮拭20次（不时旋转棉棒），需充分接触口腔粘膜。注意事项：避免用手触及棉签，采集前可先用清水轻轻漱口。为防止样本被食物或者饮料污染，取样前30分钟内应该避免进食或者饮水。 用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，放入2ml 离心管中，加入400μl裂解液ML。再加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀，可选步骤（一般不需要做）：56℃放置一般情况下该步骤可以省略，除非效果不好，再尝试加做此步骤 。加入400μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。此时溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的液滴，然后挤压去除拭子，将尽可能多的裂解液转移至新的离心管棉签的棉花可能还吸附一些液体，如果要提高产量，可以用干净镊子夹挤出液体后弃棉花