人IL-17AF定量检测试剂盒(ELISA)说明书.docxVIP

仅供科研使用，不得用于临床检验。人IL-17AF定量检测试剂盒（ELISA）说明书【货 号】YKE-1434【产品名称】通用名称：人IL-17AF定量检测试剂盒（ELISA）英文名称： Human IL-17AF【包装规格】96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中IL-17AF的浓度。【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人IL-17AF单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的IL-17AF与固相抗体和检测抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(streptavidin-HRP)。洗涤后，加入显色底物TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中IL-17AF的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm波长(参考波长570 -630 nm)测定吸光度值。【主要组成成分】主要成分组分规格数量包被微孔板96T1板标准品4000pg/mL2管抗体80uL1管 辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素150uL1管10×检测缓冲液5mL1瓶标准品稀释液5mL1瓶TMB显色液10mL1瓶TMB终止液10mL1瓶洗涤缓冲液(20X)30ml1瓶封板膜4张注意：使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致【样本要求】 样本类型和采集细胞培养上清 300 g 离心 10 分钟去除沉淀物，即刻检测, 或者分装，-20℃以下贮存。血清样本 分离管分离血清。在 1000 g 离心之前，使血样凝集 30 分钟。吸取血清样本之后即刻检测，或 者分装，-20℃以下贮存。 血浆样本 EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。1000 g 离心 3 0 分钟收集样本。即刻检测，或者 分装，-20℃以下贮存。 本试剂盒可能适用于其它生物学样本。细胞培养上清、血清和血浆已经过验证。 注意：检测前，样本中可见的沉淀必须去除。不要使用严重溶血或高血脂的样本。 样本应分装并贮存于-20℃，以避免人IL-6活性的丢失。如果在 24 小时内检测，样本可以 存放在 2 - 8℃。 避免样本的反复冻融。在检测前，冷冻样本应该缓慢地恢复至室温，轻柔地混匀。样本保存和稳定性样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。【检验方法】试剂准备 检测前请将所有的试剂、样本恢复至室温。 如果浓缩的试剂出现结晶，37℃温浴，直至结晶全部溶解。 1×洗液 吸取 20×浓缩洗液 30 ml 至 1 L 的量筒，加蒸馏水或去离子水至600 ml，轻轻混匀，避免泡 沫。 转移至干净瓶内。2 - 25℃贮存，1×洗液可稳定 30 天。1×检测缓冲液 吸取 10×浓缩检测缓冲液 5 ml 至 100 ml 量筒，加蒸馏水或去离子水至 50 ml，轻轻混匀，避 免泡沫。 2 - 8℃贮存，1×检测缓冲液可稳定保存 30 天。 检测抗体 稀释前充分混匀。根据标准品和待测样本的数量，用 1×检测缓冲液按 1：100 稀释浓缩的检 测抗体。 注意：请在 30 分钟内使用稀释后的检测抗体。 辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素 稀释前充分混匀。 根据标准品和待测样本的数量，用 1×检测缓冲液按 1：100 稀释浓缩的辣根过氧化物酶标记的 链霉亲和素。 注意：请在 30 分钟内使用稀释后的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。 样本稀释 如果样本需要稀释，请用试剂盒提供的 1×检测缓冲液稀释血清/血浆样本，用细胞培养基稀释 细胞培养上清。人IL-17AF标准品 用蒸馏水或去离子水重溶人IL-17AF标准品，重溶体积标注在人IL-17AF标准品的标签上。轻柔 地涡旋震荡，确保充分混匀，重溶后标准品的浓度为4000 pg/ml。重溶后静置 10 - 30 分钟。稀释 前充分混匀。 请使用聚丙烯管进行标准品稀释。标准曲线制作血清/血浆样本标准曲线的制作： 取 250 μl 浓缩的人IL-17AF标准品，加入 250 μl 标准品稀释液，作为标准曲线的最高浓度 (2000 pg/ml)。在每一个试管中加入 250 μl 标准品稀释液。使用高浓度标准品做 1：1 系列稀释。每次移 液时，请确保充分混匀。以标准品稀释液作为标准曲线的零浓度。 细胞培养上清样本标准曲线的制作： 取 250 μl 浓缩的人IL-17AF标准品，加入 250 μl 细胞培养基，作为标准曲线的最高浓度 (2000 pg/ml)。在每一个试管中加入 250 μl 细胞培养基。使用高浓度标准品做 1：1 系列稀释。每次移液 时，确保充分混匀。以细胞培养基作为标准曲线的零【检测步骤】