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第八章烟叶酚类物质测定第一节 烟叶中酚类物质存在特点及其测定意义一、存在特点1.种类：烟叶酚类物质相当复杂，种类繁多，烟草含量较多的酚类多酚：绿原酸、芸香苷、莨菪亭，它们分别属于咖啡单宁类、黄酮类和香豆素类。2.酚类物质在烟叶中的存在状态在活体组织中酚类物质几乎全部以糖苷和酯的形式存在。在烟叶调制期间，多酚被氧化转变为微溶棕色素存在，如芸香苷氧化多酚氧化产物也可以进一步和蛋白质、金属离子如Fe，Cu结合形成黑色素（棕色素）。3.酚类物质在烟叶中的分布特点3.1不同类型烟叶酚含量不同：烤烟晾晒烟3.2不同部位：上部叶中部叶下部叶3.3一片叶的不同部位：叶尖叶基部3.4矿质营养：Ca，B，Mg，N, P3.5生长调节剂：生长素类二、烟叶酚类物质测定意义1.酚类物质与酶促棕色化反应关系密切，影响烟叶颜色。2.芳香值=多酚/蛋白质氮，表征烟叶香气。第二节、烟叶中酚类物质的测定测定方法概述1.依据酚类物质可以被高锰酸钾氧化的性质，高锰酸钾滴定法2.酚类化合物在碱性条件下可以与4-氨基安替比林反应生成红色染料，比色3.酚羟基可与酒石酸铁中的铁离子反应生成蓝色络合物比色4.酚类物质还原福林试剂生成蓝紫色物质，比色二、高锰酸钾滴定法测多酚此方法多应用在茶叶上原理：酚类物质可以被高锰酸钾氧化，烟叶中还有一些酚类衍生物和非酚类物质也可以被高锰酸钾氧化，会使测定结果偏高。因此滴定须分两步进行：第一步滴定待测液中总还原性物质，第二步用明胶盐溶液将酚类物质沉淀后，测定待测液中其它还原性物质含量，二者之差就是样品中多酚含量。但是绿原酸不能被沉淀，因此，此法不易用来测定烟草多酚。0.1%靛红作指示剂。酚类提取：采用沸水浴方法提取。三、氨基安替比林比色法此方法用来测样品中挥发性酚类化合物，常常应用在食品，水等挥发酚的测定。灵敏度最高高。原理：酚类化合物在碱性溶液中，当有氧化剂铁氰化钾存在时，可以与4-氨基安替比林生成一种红色染料，用分液漏斗将红色染料萃取到氯仿层，在460nm处比色。用苯酚作标准曲线，计算出样品中挥发性酚类物质含量。1此方法酚的提取步骤比较麻烦：先在2.5mol/L硫酸溶液中加热回流1小时，将样品中中挥发酚提取出来。通入水蒸气把酚蒸馏出来，收集并定容。2苯酚腐蚀性强，为结晶体，不好秤取。3蒸馏装置不能漏气，且所用的橡皮类物质需要事前用碱水浸泡，并水煮10min。四、酒石酸比色法原理：酚类物质的羟基与酒石酸铁中的铁离子生成蓝色络合物，根据络合物溶液颜色深浅，在540nm处比色，可测出烟叶中酚类物质含量。以儿茶酚或没食子酸乙酯作标准溶液。可以用来测定烟草中的多酚。此方法酚的提取与福林法测多酚提取步骤一样。五、福林法测烟叶多酚/总酚1.原理; 在碱性条件下利用多酚的还原性，多酚可以将磷钨钼酸还原成蓝色，蓝色深浅与多酚含量城正相关，可以用分光广度计进行测定。 2.试剂和仪器：试剂：儿茶酚或没食子酸乙酯，钼酸钠，磷钨酸，Na2CO3仪器：水浴锅，721分光光度计，试管，三角瓶，漏斗，滤纸，移液管。3. 操作步骤：3.1待测液制备：50mg烟样于150mL三角瓶中，加入80℃蒸馏水50mL，803.2 测定：2支干试管，各加入5ml待测液，一支加福林试剂5ml，一支加5ml代替福林试剂，摇匀3分钟后，各加入5ml10％Na2CO3,振荡，室温下显色1h，以不加福林试剂的试管管为对照，700nm比色。3.3 绘制标准曲线：儿茶酚母液：1mg/ml，再依次配制成100ml中含有儿茶酚0.5，1.0，1.5，2.0mg的4种不同浓度的标液。取5支试管，分别加入上述标液5ml，对照加蒸馏水5ml，然后各加福林试剂5ml，摇匀3分钟后，各加入5ml 10％Na2CO3,振荡，室温下显色1h，700nm比色。P:查标准曲线得到得100ml溶液中酚的重量G：样重