血清总蛋白与球比值测定.pptVIP

* 血清总蛋白和白/球比值测定 一、血清总蛋白的测定（双缩脲法） 二、血清白蛋白的测定（溴甲酚绿法） 实验目的： 1、熟悉血清总蛋白的测定方法：双缩脲法 2、掌握血清总蛋白测定的临床意义 3、熟悉血清白蛋白的测定方法：溴甲酚绿法 4、掌握血清白蛋白测定和白蛋白与球蛋白的含量比（A/G）测定的临床意义 一、血清总蛋白的测定 实验原理： 1、双缩脲反应：两个尿素分子缩合生成双缩脲（H2N—OC—NH—CO—NH2)，在碱性溶液中与铜离子作用，生成稳定的紫红色配合物，即双缩脲反应。CuSO4的碱性溶液称双缩脲试剂。 双缩脲+铜离子 紫红色 2、蛋白质的定量测定：蛋白质与双缩脲相似，分子中的肽键能与双缩脲试剂形成紫色配合物。这种紫色配合物在540nm处有明显吸收峰。吸光度在一定范围内与蛋白质含量成正比，常用于蛋白质的定量测定。 碱性溶液 生理盐水 双缩脲试剂 蛋白质标准液 待测血清稀释液 生理盐水：氯化钠0.9g溶于10ml蒸馏水。 双缩脲试剂：硫酸铜3.0g溶于500ml蒸馏水， 加酒石酸钾钠9.0g，完全溶解后，加入24%氢氧化钠100ml，用蒸馏水稀释到1L，置于聚氯 乙烯瓶内盖紧保存。 蛋白质标准溶液：收集混合血清，经凯氏定 氮法定值，用作蛋白质标准液。储存于冰箱中备用。也可用10mg/mL牛血清白蛋白替代。 待