2017-2018学年高中生物浙科版（浙江专版）选修一教学案：第一+实验一+大肠杆菌的培养和分离+Word版含答案.doc

实验一大肠杆菌的培养和分离 一、微生物 1．概念：微生物是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。 2．利用：生产抗生素，制作发酵食品，治理环境污染等。 二、培养基 1．概念 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 2．营养构成 各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐及生长因子，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 3．培养基的类型 (1)按物理性质分：固体培养基、半固体培养基、液体培养基。 (2)按目的用途分：鉴别培养基、选择培养基。 4．微生物生长对特殊营养物质的要求 (1)细菌培养基要用蛋白胨和酵母菌提取物来配置，细菌喜荤。 (2)霉菌培养基一般用无机物配制或加蔗糖的豆芽汁即可，霉菌喜素。 5．微生物生长对pH的要求 细菌要求在中性偏碱(6.5～7.5)的环境中生长；真菌要求在中性偏酸(5.0～6.0)的环境中生长。 三、无菌技术 1．获取纯净培养物的方法 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下： (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2．消毒和灭菌 (1)概念：[填表] 项目 方法 结果 常用的方法 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部一部分微生物(不包括芽孢和孢子) 煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌 (2)常用方法：[连线] 四、分离细菌的两种方法比较 项目 划线分离法 涂布分离法 工具 接种环 玻璃刮刀 原理 划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，到划线最后部分细菌间距离加大，经培养后能得到单菌落 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 特点 方法简单，但单菌落较难分开 单菌落更易分开，但操作复杂些 目的 使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落 五、大肠杆菌的培养与分离 1．大肠杆菌 (1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。 (2)繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。 2．扩大培养与分离 扩大培养用LB液体培养基，划线分离用LB固体平面培养基。 3．大肠杆菌分离过程 (1)培养基灭菌：50 mL LB液体培养基和50 mL LB固体培养基及培养皿使用高压蒸汽灭菌。(2)倒平板：将培养基分别倒入4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面。 (3)接种：在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，在每分钟200转的摇床上振荡培养12 h。 (4)划线分离：用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿。培养皿倒置(盖在下面)，放在37 ℃恒温培养箱中培养12～24 h后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落。 (5)培养观察：在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在空白斜面上，在37 ℃下培养24 h后，置于4 ℃冰箱中保存。 1．下列操作错误的是(　　) A．用酒精擦拭双手 B．用氯气消毒水源 C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃器皿(吸管、培养皿)用酒精擦拭灭菌 解析：选D　对玻璃器皿一般应进行干热灭菌，而不是用酒精擦拭消毒。 2．下列有关涂布分离法的叙述，错误的是(　　) A．首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释 B．将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 C．在适宜条件下培养 D．都可在培养基表面形成单个的菌落 解析：选D　涂布分离法是将菌悬液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有在稀释度足够高的菌悬液里，聚集在一起的微生物才能被分散成单个细菌，从而在培养基表面形成单个的菌落。 3．进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置？ 提示：恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸气凝结成的水滴在培养基表面更好地挥发；如果正放，则水分形成的水滴会落入培养基表面并扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则会导致菌随水扩散，很难再分成单菌落，达不到分离目的。 4．实验完成后，接种过细菌的器皿应如何处理？ 提示：所有接触过菌的器皿都要先高压灭菌后再洗涤(特别是培养基)；使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃。  1．LB培养基的分类及用途 2．几种常用灭菌和消毒