实验一 蛋白质的定量测定6.pptVIP

实验一 蛋白质的定量测定——Folin-酚试剂法(Lowry法) 蛋白质及氨基酸的呈色反应 （一）双缩脲反应 是由两分子尿素缩合成一种化合物的反应。 蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应，形成紫红色或蓝紫色络合物。通常可用此法来定性鉴定蛋白质的存在，也可根据反应生成颜色的深浅，在540nm波长处进行比色，定量测定蛋白质的浓度。允许测定范围为0.2-1.7mg蛋白质/ml。 （二）蛋白质的黄色反应 芳香族氨基酸特别是酪氨酸和色氨酸的蛋白质所特有的呈色反应。 蛋白质遇硝酸后，产生白色沉淀，加热后沉淀变成黄色，再加碱，颜色加深呈橙黄色。 （三）酚试剂反应 蛋白质分子一般都有酪氨酸，而酪氨酸中的酚基能将福林试剂中的磷钼酸及磷钨酸还原成蓝色化合物（即钼蓝和钨蓝的混合物）。 （四）乙醛酸反应 在蛋白质溶液中加入乙醛酸，并沿试管壁慢慢注入浓硫酸，在两液层之间就会出现紫色环，凡含有吲哚基结构的化合物都有这一反应。 （五）坂口反应 精氨酸分子中所含量胍基能与次溴酸钠（或次氯酸钠）及α-萘酚在碱性溶液中形成红色产物。 （六）米伦反应（Ｍillon） 米伦试剂为硝酸汞、亚硝酸汞、硝酸、亚硝酸的混合液。蛋白质溶液中加入米伦试剂后即产生白色沉淀，加热后沉淀变为红色。酚类化合物有此反应。 常用的蛋白质定量测定的方法 凯氏定氮法 双缩脲法 Folin-酚法 紫外（UV）分光光度法