实验四 尿标的微生物学检验.pptxVIP

实验四;;尿标本的采集与处理： 正常人的尿液通常是无菌的，但在外尿道除有正常菌群外，尚有其他一些病原菌和条件致病菌，可通过多种途径引起尿路感染（urinary tract infection, UTI ）。如：葡萄球菌、链球菌、肠球菌、大肠埃希氏菌、变形杆菌等。 标本采集方法常有五种：导尿法、中段尿采集法、肾盂尿采集法、膀胱穿刺采集法、留尿法。;1）导尿法：采取导尿管导尿，是一种较好的无菌采集法，可直接插导管采集尿液标本或滞留导管集尿。直接导尿先让尿流弃15ml，滞留导管集尿先用70%酒精消毒导管口再用针筒抽取，取尿量为10～15ml，直接导尿有将尿道细菌进入膀胱的危险，尽量避免此方法。 2）中段尿采集法：目前国内临床常用此法。女性病人先用肥皂水或1:1000高锰酸钾水溶液冲洗外阴及尿道口；男性病人应翻转包皮冲洗，用1:1000新洁尔灭消毒尿道口；用无菌生理盐水或无菌水冲去消毒液，再用灭菌纱布擦干，让病人排尿，弃去前段尿，收集中段尿10～20ml，置于无菌容器内，立即加盖送检。;3）肾盂尿采集法：由泌尿科医生在膀胱镜下分别采集左右侧输尿管的尿液，并做好标记，以防左右侧错位，尿液采集量不少于1ml。 4）膀胱穿刺采集法：在病人耻骨上膀胱区用碘酒、酒精消毒（要求病人不排尿充盈膀胱）以无菌针筒做膀胱穿刺，抽取尿液后针筒插入橡皮塞送检。此法主要用于厌氧培养。 5）留尿法：疑为尿道结核患者，可用一洁净容器，留取24h尿液，取其沉淀部分盛于清洁瓶内送检。;通常取晨起第一次尿送检。 由于治疗所用药物多数均通过尿液排泄，因此，无论用何种方法采集尿液都宜在用药前进行。 尿液标本的采取和培养最大的问题是污染杂菌，故应严格进行无菌操作 尿液标本中不得加防腐剂，否则会影响检出的阳性率。 尿液标本采集后要立即送检（常规2h内）或存放于4℃冰箱（不超过24h，教材规定为8h），因搁置时间稍长尿中病原菌可在室温中增殖，而影响细菌计数的正确性。应注意淋病奈瑟菌培养时标本不能冷藏保存。 ;;检验程序： 尿标本 直接涂片染色 分离培养 细菌计数 直接药敏试验 （特殊细菌检查离心沉淀）;检验程序： 革兰阴性杆菌 氧化酶（Oxi） - + 肠杆菌科细菌 非发酵菌 ;麦康凯平板（Mac）： 是一种肠道杆菌专用的弱选择性培养基。培养基成分中除基础成分外，主要含有0.5%胆盐、1%乳糖、中性红指示剂。 胆盐：一方面对沙门氏菌有刺激生长作用，另一方面对革兰氏阳性菌及大肠埃希氏菌有抑制作用。 1%乳糖：作为一种指示糖。 中性红指示剂：pH6.8—8.4，由红—黄。 （分解乳糖的细菌产酸，使菌落周围胆盐堆积变浑浊） ;实验器材： 1、标本：1#、2#、3#模拟尿液标本。 2、培养基：BA、Mac、普通营养琼脂、KIA、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、枸橼酸盐斜面、尿素、苯丙氨酸斜面、硝酸盐蛋白胨水。 3、试剂：9.9ml无菌生理盐水、革兰染液、氧化酶试剂、3%H2O2、靛基质试剂、甲基红试剂、VP甲液、VP乙液、10%FeCl3、硝酸盐还原试剂甲液、硝酸盐还原试剂乙液。 4、其它：无菌空平皿、载玻片等。 ;实验方法： 一、分离培养 用无菌方法将1#、2#、3#模拟尿液标本分别划线接种于BA、Mac上，置35℃培养18—24小时。 二、直接涂片染色 取上述1#、2#、3#标本分别作涂片、革兰氏染色、镜检。（要求绘图并描述） 三、细菌计数（倾注平板法） 0.1ml尿液 9.9ml无菌NS 混匀 取0.1ml（1:1000稀释）标本 无菌空平皿