厚朴提取物工艺的研究.docVIP

厚朴提取物工艺研究 叶卉，冉晓辉，俞凯 (四川泰华堂制药有限公司，广汉618300) [摘要】目的建立质量和收率稳定的厚朴总提取物的提取方法，适应工业化生产。 方法厚朴用乙醇渗漉，减压浓缩制得提取液，过大孔吸附树脂柱，用不同浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得厚朴总提取物，比较不同浓度乙醇的提取率。 结果用70％乙醇洗脱，厚朴总提取物收率为4．74％，其中厚朴酚和和厚朴酚含量占总提取物的46．00％。 结论经中试生产，厚朴分离纯化工艺科学合理，稳定可靠，适应工业化生产。 凹叶厚朴忡fi口Q疗记i眦凰Rehd．et wilsj．var 6i如6如Rehd． et wils的干燥干皮。味苦，辛温，归脾、胃、肺、大肠经。具温中 下气、化湿引滞功效。用于消炎灭菌、胸腹胀满、肠梗阻、痰饮 喘满等症。主要含厚朴酚、和厚朴酚，其次为生物碱，还含少量 挥发油等?。厚朴分离纯化一般用硅胶柱层析法。2 o。但该法 不适用于工业化生产，结合生产实际，为保留厚朴提取物中的 生物碱和酚类成分，将厚朴用乙醇渗漉，通过大孔吸附树脂分 离纯化，可得到质量和收率稳定的厚朴总提取物，其收率为 4．74％，其中厚朴酚、和厚朴酚占46．00％。 1仪器与试药 Lc．10A高效液相色谱仪(岛津)，sPD-10A紫外检测仪，微 量进样器，树脂柱，AB-8型大孔吸附树脂(药用级，平均粒径A 130一140)；厚朴酚(中国药品生物制品检定所，批号：110729- 200309)，和厚朴酚(中国药品生物制品检定所，批号：110730— 200206)。厚朴药材(四川泰华堂制药有限公司提供，经鉴定学 名为M‘昭加地吧历ci耽胁Rehd．et wils，鉴定人：叶卉。氢氧化 钠、盐酸、联苯等其余试剂均为分析纯。 2厚朴的含量测定p1 2．1 色谱条件色谱柱：YwG c18(5 mm×20 cm，10¨m)；流 动相：甲醇·水-乙酸(66：32：1)；流速：1．0 mL·min～，柱温：室 温；检测波长：254 nm；纸速2 mm·min～。 2．2标准曲线取和厚朴酚对照品15 mg，精密称定，置于 10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得1．5 mg·mL。1 的和厚朴酚对照品溶液。取厚朴酚对照品125 mg，精密称定， 置于lO mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，即得1．25 mg·mL-l厚 朴酚对照品溶液。精密吸取和厚朴酚溶液O．4，O．8，1．2，1．6， 2．O mL，厚朴酚溶液0．4，0．8，1．6，2．4，3．2 mL，分别置于10 mL 量瓶中，并精密加入2 mg·mL．1联苯甲醇溶液，均以甲醇稀释 7至刻度，分别进样5灿测定，以重量比(％分／形内标)为横坐标， 以峰高比(^绀分／^内标)为纵坐标作图，线性关系良好。 2．3样品测定取相当于生药含量1 g的测定溶液，水浴蒸至 近于，加甲醇50 mL浸渍24 h，并振摇3或4次，每次l min，滤 过，加入内标2 mg·mL．1联苯溶液O．4 mL，用甲醇定容至 50 mL，作为供试品溶液。再进样测定，计算，即得。 3大孔吸附树脂的分离纯化 3．1大孔吸附树脂的吸附厚朴经乙醇渗漉提取后，减压浓 缩至含不同乙醇浓度的提取液，过大孔吸附树脂吸附，收集通 过树脂柱后的液体测定厚朴酚、和厚朴酚含量，计算树脂吸附 率。并将大孔吸附树脂再生后，选用含20％乙醇提取液分别过 大孔吸附树脂吸附，收集通过树脂柱后的液体测定厚朴酚、和 厚朴酚含量，计算树脂的吸附率。结果见表1。由表l可以看 出，不含乙醇与20％乙醇上柱吸附树脂吸附率差异无显著性， 40％乙醇上柱吸附与20％乙醇上柱吸附树脂吸附率差异有显 著性，70％乙醇与20％乙醇上柱吸附树脂吸附率差异有极显著 性。而乙醇浓度越低上柱，树脂的再生运行状态越差，结合生 产实际，考虑生产成本，选用含20％乙醇提取液上柱吸附。 表1厚朴不同乙醇浓度提取物的树脂柱吸附率n=5 “P值为第一次树脂吸附与20％乙醇上柱吸附的差异性比较 3．2大孔吸附树脂的洗脱树脂吸附有效成分洗脱完全，主 要选择乙醇浓度。厚朴提取液经大孔吸附树脂吸附后，运用不 同浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，运用HPLc法测定厚朴酚、和厚 朴酚含量，计算树脂吸附有效成分的洗脱率，并考察洗脱液的 千膏收率，结果见表2。由表2可以看出，30％乙醇与70％乙醇 洗脱比较树脂吸附有效成分洗脱差异有极显著性，95％乙醇与 70％乙醇洗脱比较树脂吸附有效成分洗脱率差异有显著性。 考虑洗脱液干膏收率，选用70％乙醇洗脱。 表2不同浓度乙醇洗脱有效成分洗脱率n=5 “P值为与70％乙醇洗脱差异性比较 3．3 大孔吸附树脂的再生大孔吸附树脂的循环使用最关键 是吸附树脂的再生。就树脂的再生拟定4种方案，厚朴提取液 吸附、洗脱后，用拟定的同一方案再生，