免疫印迹技术ANA谱测定.PPTVIP

免疫印迹技术ANA谱测定 罗俐梅 Westernblot法 SDS电泳 转移电泳 酶免疫检测 条带印迹法: ANA谱 纯化抗原的免疫印迹法 纯化可提取性细胞核抗原（ENA）包被于硝酸纤维膜上，待测血清标本与之反应，如存在相应抗体，则会结合上去，并进一步结合酶标记的二抗，经酶底物显色即可观察到相应的抗体。 ⑥ 加底物显色，观察结果 ① 纯化抗原膜条（膜条试剂盒） ④ 加入酶标二抗反应 ③ 洗去未反应蛋白 E E E ⑤ 洗去多余酶标二抗 自身抗体 非特异蛋白 免疫印迹法检测ENA谱的原理 ENA检测方法 ② 加入标本反应 E 试剂 样本稀释液:直接使用 工作洗涤液：直接使用（已配好） 酶标记二抗:直接使用（已配好） 底物:直接使用 操作步骤 润膜：取出反应槽，每槽加入1.5ml样本稀释液，缓慢于室温孵育5分钟,将膜条充分润湿，倒掉样本缓冲液 加样：然后在每个槽中加入样本缓冲液1.5mL，并加入待检血清或质控血清15μL，充分混匀，缓慢在室温振摇孵育30分钟。 洗涤：弃去槽内液体，在吸水纸上拍干，用洗涤液洗涤3次，每次每槽加稀释洗涤液1.5ml，洗涤5分钟/次。 操作步骤 加酶：每槽加入稀释后酶标抗体1.5mL，混匀，缓慢在室温摇床上孵育30分钟。 洗涤：同前洗涤。 显色：每槽加入显色液1.5mL，室温反应10分钟