免疫球蛋白测定方法与影响因素ppt课件.pptVIP

图3：散射比浊模式BN- II 透射比浊模式图 图4： BN- II ② BN II的测定方法：终点散射比浊法（固定时间测量法） ③ 标准品与定标曲线及使用的公式 Ig标准品可溯源CRM470， 采用六点定标， 用Logit-log回归曲线， Logit-log回归曲线 Logit-log计算浓度 ④ 测量范围与可测量范围 ⑤ BN II的抗原过剩检测原理 预反应检测抗原过剩: BN II只有三个项目(IgM,AFP,以及IgA)可运用预反应原理(Pre-reaction) 进行抗原过量检查。 抗原过量检查见图6 BN II的抗原过剩检测 IgM为例说明BN II的抗原过量检测原理 因此BN II在检测IgA和IgM时，能将抗原过剩的风险降到最低！ 但是， BN II的抗原过量不能完全消除，在极少数情况下，非常高的免疫球蛋白浓度可能会产生错误的低结果。尤其是单克隆免疫球蛋白可能会显示与多克隆标准品不同的反应，在个别情况下，这可能会导致结果降低的假象或导致非线性结果。 ⑥BN II的非特异性反应检测方式： 两种选择方式 BN II对所有样本进行非特异性反应鉴别的两种选择方式： 非特意性反应1 非特异性反应2。 3.2.3、速率散射比浊法： 速率散射比浊法：以BECKMAN IMMAGE为例 ① IMMAGE的光学系统： 激光光源, 波长670nm, 90度 检测角检测Ig 一是作为领导干部一定要树立正确的权力观和科学的发展观，权力必须为职工群众谋利益，绝不能为个人或少数人谋取私利 免疫球蛋白测定方法与影响因素九0三医院检验科 樊英俊 免疫球蛋白（Ig）的种类： IgG（IgG1-4亚类）、 IgA（IgA1-2亚类）、 IgM、 IgD、 Kappa、Lamda 一、免疫球蛋白的测定方法： 1、免疫球蛋白的测定方法分类 见表1 见表1 免疫球蛋白的测定方法分类 方 法 原 理 标本类型 简 要 评 价 盐沉淀（金沉淀） Ig在某些盐（金化合物）溶液中形成沉淀，再用总蛋白测定法测定Ig含量 血清 慢，非特异性，不能分类Ig，方法过时 电 泳 蛋白分离成Alb和各种球蛋白;Ig在γ带 血清 慢，不能分类Ig，是检测单克隆Ig的筛选方法 免疫扩散（ （彩扩法） ） Ig扩散到含有抗体的凝胶中行成一个环状的免疫沉淀线，环的直径与抗原浓度成正比 血清体液 较准确，慢 免疫荧光 吸附在固体表面的Ig与样品中的Ig竞争荧光标记抗体，荧光信号强弱与样品中的Ig成反比 血清体液 准确，慢 电免疫扩散 （火箭电泳） Ig扩散到含有抗体的凝胶中完成电泳，凝胶火箭沉淀峰的高度与Ig浓度成正比 血清 准确，慢 放射免疫测定 Ig与抗体反应置换放射标记的Ig， 血清体液 非常灵敏，用于IgE测定 透射比浊 Ig与抗体反应，在沉淀剂条件下，生成的浊度与Ig浓度成正比 血清 快速 不能发现AGXS 终点散射比浊 Ig与抗体反应，在沉淀剂条件下，其形成散射光强度与Ig浓度成正比 血清体液 快速，准确，可通过预反应发现AGXS 速率散射比浊 Ig与抗体反应，在沉淀剂条件下，其形成散射光强度的速率与Ig浓度成正比 血清体液 快速，准确，可测定AGXS 目前临床常用免疫球蛋白测定方法： 免疫比浊法，包括 ①、透射免疫比浊法： ②、终点散射免疫比浊法： ③、速率散射免疫比浊法： 二、免疫球蛋白测定的影响因素 包括: ①标准液； ②抗体； ③使用的仪器与测定方法； ④样本自身特性； ⑤实验室条件和操作人员技能； 1、标准液对测定结果的影响 1.1 标准液中Ig类型的不均一性： 1.2 标准液中Ig分子大小的不均一性 那么要求Ig标准液能代表健康人群平均水平的Ig类型和分子大小，基质效应要小。 1.3 Ig的国际标准： 1.3.1 WHO 67/97 定义：每瓶含100IU的血浆蛋白冻干品 WHO 67/97的明显缺限: ①标准品复溶后造成体积差异。 ②标定方法仅使用放射免疫扩散技术（RID），方法技术要求不严格。不适用于现代免疫比浊技术。 ③同一特定蛋白的不同批参考标准间有明显差异。 ④在实际应用中，该标准不能解决特定蛋白免疫监测结果之间的可比性。 1.3.2 CRM－470 1989年由国际临床化学学会（IFCC）会同美国病理学会（CAP），指定由Behring公司负责制备国际参考品。1992年欧洲经济共同体的共同体参考局（Bureau Communitaire de Reference BCR）认可该国际参考品，并给予该参考品代号CRM－470（认可参考品470）。为目