2010版药典培训资料_ 中国药典2010版药品微生物检验指导原则ppt课件.ppt

2010-03 2、检测限：是指在替代方法设定的检验条件 下，样品中能被检出的微生物的最低数量 ，该数量是指在稀释或培养之前初始样品所含有的微生物数量，而不是指检验过程中某一环节的供试液中所含有的微生物数量 。 验证的关键是确定接种菌的最低数量（每单位不超过5cfu），分别用药典方法和替代方法对该菌进行检验，比较两种方法的差异。与国外药典规定相同，要求试验菌的接种量应能够在采用药典方法检验时，有50％的检出率。 检测限验证至少应重复进行5次。 3、重现性：是指相同的样品在正常的实验条件（如实验场所、实验人员、仪器、试剂的批次等）发生变化时，所得检验结果的精密度 。反映了微生物检验方法在检验结果上抵抗操作和环境变化的能力 。 验证的关键是使接种菌的量在检测限以上，评价验证结果时，应排除样品均一性的影响 4、耐用性：是指当方法参数有小的刻意变化时，检验结果不受影响的能力，为方法正常使用时的可靠性提供依据 。 对替代方法进行耐用性评价，确定方法操作的关键注意点。 在开展了上述评价后，可以不必比较替代方法的耐用性与药典方法的差异。 定量检验的方法验证 1、准确度：是指替代方法的检验结果与药典方法检验结果的一致程度。准确度的确认应在检验的范围内。通常用微生物的回收率（％）来表示准确度 。 验证的菌浓度应该在检测范围内，一般应选择能够准确计数的最高浓度，系列稀释至较低浓度，并且至少应该有5种浓度，每种浓度重复检验5次。 替代方法的回收率应该达到70％以上。 当替代方法并不依赖微生物生长出菌落或出现混浊来进行定量时，可能出现回收率高于药典方法的情况，此时应结合专属性的内容对准确性进行评价。 2、精密度：是指在检验范围内，对同一个均匀的样品多次重复取样测定，其检验结果的一致程度。通常采用标准偏差或相对标准偏差（变异系数）来表示 。 验证的菌浓度同准确度，每种浓度重复检验10次。 可以接受的相对标准偏差（RSD）应不大于35％。一般来说，替代方法的相对标准偏差（RSD）应不大于药典方法。在该项目上，USP 的规定是15％～35％，研究表明，当含菌浓度在30～300cfu/ml时，计数结果的RSD完全可能在15％以内，因此，指导原则中对该指标作了修改。 3、专属性：是指通过检测适宜的试验菌，以证明检验方法与其设定目的相适应的能力。 例如，菌落计数平皿法其设定目的在于检出一定数量的微生物，则其专属性验证应证明当样品中存在一定数量的试验菌时，通过平皿法检验，能够检出试验菌，而样品的存在不会对结果造成影响。 验证的关键是合理评价样品的存在对检验结果的影响，当替代方法不依赖微生物生长出菌落或出现混浊就可以定量时 ，这种评价显得尤为必要。 4、定量限：是指样品中能被准确检验的微生物最低数量。 验证的关键是在检验范围的低限，选择尽可能低的5种菌浓度，每种浓度重复测定5次，替代方法的定量限不得大于药典方法。 5、线性：是指在检验范围内，检验结果与样品中微生物数量成比例关系的程度。线性验证时必须覆盖能够准确检测的所有浓度范围。 每株菌至少应该有5种浓度，每种浓度至少测定5次。 在对验证数据进行处理时，应以样本中预期的菌浓度为自变量，以不同方法的计数结果为因变量，进行线性回归分析，计算相关系数，替代方法的相关系数不得低于0.95。 6、范围：是指能够达到一定的准确度、精密度和线性，检验方法适用的高低限浓度或数量的区间。 7、重现性：是指相同的样品在正常的实验条件（如实验场所、实验人员、仪器、试剂的批次等）发生变化时，所得检验结果的精密度。反映了微生物检验方法在检验结果上抵抗操作和环境变化的能力 。 验证的关键是使接种菌的量在检测限以上，评价验证结果时应制备均一的实验样本 8、耐用性：是指当方法参数有小的刻意变化时，检验结果不受影响的能力，为方法正常使用时的可靠性提供依据。 当检验方法采用基于培养的技术时，一般的参数变化是指对培养温度和时间进行调整，上述调整对检验结果的影响并不显著。 微生物限度检查法应用指导原则 此原则的制定是为了更好应用微生物限度检查法，对标准和方法中的特定内容及标准的应用做进一步说明。 应用此原则应结合2010年版《中国药典》微生物限度检查法详细解读。主要对以下各条作了明确。 对所用试剂的要求：有效性和无毒