B基因表达产物与心肌细胞缺血的关系及与A药物保护损伤的关系ppt课件.pptxVIP

遗传实验设计之B基因表达产物与心肌细胞缺血的关系及与A药物保护损伤的关系 实验目的 已知：（1）A药物具有保护心肌细胞免受缺血损伤的作用；（2）心肌细胞缺血过程中B基因的表达产物B蛋白表达量会发生改变需明确：（1）B基因的表达产物与心肌细胞缺血间的关系？（2）在A药物保护心肌细胞免受缺血损伤过程中，B基因的表达产物是否参与其中？实验原理 免疫组化化学（immunocytochemistry）将抗原、抗体间的免疫反应引入细胞标本，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再与标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链酶亲和素等）结合，最后通过显色反应或荧光来显示细胞中抗原（多肽、蛋白质等），在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，籍此对细胞内某抗原作定性、定位以及定量检测。实验原理 SABC技术即链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术，其特点是利用链霉亲和素分别连接生物素标记的二抗和生物素标记的酶。由于链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力（是一般抗原抗体亲和力的一百万倍），其对组织和细胞的非特异吸附很低，因此背景很低，具有高敏感性、低背景和操作简便的优点。实验原理12307100162 临八 蒋逸雯体外建立心肌细胞缺血模型取新生SD乳鼠的心肌细胞进行培养，以缺血液（无糖）及高纯氮气（95%N2、CO2）持续通气，来建立心