固相萃取技术课件.ppt

;一、概述;一、概述;一、概述 样品类型; 固相萃取（SPE）是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和和富集的目的。;1、基本原理;2.固相萃取的分离模式 ;有机溶剂非极性顺序;反相固相萃取;正相固相萃取;硅胶柱(silica);正相萃取或反相萃取选择原则;离子交换固相萃取;三、固相萃取的操作步骤;一是为了润湿和活化固相萃取填料，二是为了除去填料中可能存在的杂质，减少污染。 采取的方法是用一定量溶剂冲洗萃取柱。 反相类型的固相萃取硅胶和非极性吸附剂介质，通常用水溶性有机溶剂如甲醇预处理，然后用水或缓冲溶液替换滞留在柱中的甲醇。 正相类型的固相萃取硅胶和极性吸附剂介质，通常用样品所在的有机溶剂来预处理。 离子交换填料一般用3～5mL 去离子水或低浓度的离子缓冲溶液来预处理。 固相萃取填料从预处理到样品加人都应保持湿润，如果在样品加入之前，萃取柱中的填料干了，需要重复预处理过程。;b.上样;b.上样;目的是为了除去吸附在固相萃取柱上的少量基体干扰组分。 一般选择中等强度的混合溶剂，尽可能除去基体中的干扰组分，又不会导致目标萃取物流失。 反相萃取体系常选用一定比例组成的有机溶剂-水混合液，有机溶剂比例应大于样品溶液而小于洗脱剂溶液。;d.洗脱及收集分析物;四、固相萃取基本装置;（1）固相萃取柱;（2）固相萃取过滤装置;a.固相萃取过滤-加压操作;美国Supelco公司提供的给单个固相萃取小柱加压的单管处理塞。;b. 固相萃取过滤-负压抽吸;也可以采用固相萃取过滤装置同时处理多个样品;c. 固相萃取过滤-离心法;全自动固相萃取仪;固相萃取联用装置;四、固相萃取方法的建立及应用;1.固相萃取吸附剂的选择-固相萃取吸附剂的要求;键和硅胶吸附剂 石墨碳 离子交换树脂 金属配合物吸附剂 聚合物吸附剂 免疫亲和吸附剂 分子嵌入聚合物;键和硅胶吸附剂;1.固相萃取吸附剂的选择;2.固相萃取溶剂的选择;a.固定相活化溶剂的选择;b.上样萃取溶剂的选择;c.淋洗溶剂的选择;溶剂强度应足够大，以保证吸附在固定相上的分析物定量洗脱下来。 选择的洗脱溶剂应与后续的分析相适应。 选择粘度小、纯度高、毒性小并与分析物和固定相不发生反应的溶剂。选择单一溶剂效果不理想时，可以考虑使用混合溶剂进行洗脱。;3.固相萃取的应用;1）固相萃取测定生物检材中安眠酮（导数紫外） 2）双柱富集固相萃取测定钯、锶（FAAS） 3）固相萃取富集水中多环芳烃（HPLC) 4）固相微萃取富集多环芳烃GC-MS;柱色谱实验;当加入的洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同的速度沿柱向下流动，继续洗脱时，吸附能力弱的组分随溶剂首先流出。在连续洗脱过程中，不同组分或不同，色带就能分别收集，从而达到分离纯化的目的。;1 、吸附剂 常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭或纤维素粉。 选择吸附剂的首要条件：不与被分离物或展开剂发生化学反应。 吸附能力与以下几点有关： （1）吸附剂颗粒大小 （2）吸附剂含水量;2 溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑。 先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不同化合物依次洗脱。 ;常用洗脱剂的极性： 石油醚＜ 环己烷＜ 四氯化碳＜ 甲苯＜ 苯＜ 二氯甲烷＜ 氯仿＜ 乙醚＜ 乙酸乙酯＜ 丙酮＜ 乙醇＜甲醇＜水＜ 乙酸;三、实验步骤及注意事项;3、当柱中液面将要露出硅胶面时 ,加入 5mL左右的A 液 ,当硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用移液管准确加入 0.50mL以A液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为0.400g·L-1) 。 H2O∶95 %乙醇 = 1∶1 (A 液) 0.2mol· L-1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶1 (B 液) 。;4、待此混合液将要渗入柱内时 ，立即用 A 液洗脱 ，此时可以观察到有鲜明的黄、 蓝两条色带形成。黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ，而其顶部蓝色带不移动 ，当黄色带到达柱底部时 ，更换接受器 ，全部收集此黄色带 ，洗脱时间约 10 min。 5、此后改用B 液做洗脱剂 ，这时可看到蓝色带开始下移 ，当亚甲基蓝色带到达底部时 ，更换接受器 ，全部收集此蓝色带 ，洗脱时间约 30 min。 ;【洗脱时切勿使溶剂流干！ 】 使用过的吸附剂倒入垃圾桶里，切勿倒入水槽，以免堵塞水槽;习题