质谱及液质联用技术的应用ppt课件.ppt

质谱及液质联用技术的应用;主要内容;发展概述;质谱分析的原理;;质谱分析过程;质谱仪的组成;真空系统 ;离子源;　 软电离技术; 电喷雾通常应用于 FT2 MS。Little等利用FT2 MS对一个 50链寡聚糖核苷酸得到了优于10 μg/g的质量测定准确度;对一个 100链寡聚核苷酸 ,质量准确度优于 30 μg/g。测定的寡聚物的分子量可用于顺序确证 ,也可与气相裂解结合来进行序列测定。Chen R等用 FT2I CR2 MS来捕获和检测质量超过108D的单个 DNA离子。 ESI的优点是:解决了极性大、热不稳定的蛋白质与多肽分子的离子化和大分子质量、一级结构和共价修饰位点的测定问题 ,并可用于研究DNA与药物、金属离子、蛋白质和抗原与抗体的相互作用。但是样品中的盐类对样品结果影响很大 ,而且单个分子带电荷不同可形成多种离子分子峰 (重叠峰 ) ,所以对混合物的图谱解析比较困难。; 基质辅助激光解吸电离技术 (MALD I)是用小分子有机物作为基质 ,样品与基质的分子数比例为 1: (100 50000) ,均匀混合后 ,在空气中自然干燥后送入离子源内。混合物在真空下受激光辐照 ,基质吸收激光能量 ,并转变为基质的电子激发能 ,瞬间使基质由固态转变为气态 ,形成基质离子。而中性样品与基质离子、 质子及金属阳离子之间的碰撞过程中,发生了样品的离子化 ,从而产生质子化分子、 阳离子化分子或多电荷离子或多聚体离子。 常用的是基质辅助激光解吸离子 -飞行时间-质谱。目前还有更新的串联飞行时间质谱技术 。Cri mmins等用 MALD I - T OF MS分析通过二硫键键合的异二肽 ,得到了二肽及每个单体肽组分的质量。结论是 MALD I - T OF MS中的碎裂过程与氨基酸胱氨酸水溶液的光引发均裂有相似之处。提供了一种指认蛋白中二硫键的简便方法。此方法还适用于对单核细胞进行直接的化学分析。 MALD I的特点是准分子离子峰很强 ,几乎无碎片离子 ,因此可直接分析蛋白质酶解后产生的多肽混合物。另一个特点是对样品中杂质的耐受量较大 ,当用液体色谱分离蛋白质是 ,往往把盐留在样品中 ,若这些盐的量在基质的 5%以下 ,可不影响蛋白质离子的发射 ,因而往往可省去脱盐的步骤,大大缩短分析时间。;质量分析器;检测接收器;色谱质谱联用简介 ;液质联用与气质联用的区别 ;LC-MS联用技术的发展;液相色谱--质谱仪; 自1968年发表第一篇HPLC和MS在线联用的实验报告至90年代初形成的5种接口类型的商品仪器 ,经历了30年。LC-MS经历了一个漫长的研究过程 ,主要是为了解决真空技术和性能优越的接口技术。为解决质谱分析所必须的真空度 ,LC-MS一般都采用分段、多级抽真空的方法。与GC-MS联用相比 ,接口问题的解决过程是艰巨的。主要原因来自两方面:一是真空;二是样品性质。也就是说质谱仪的高真空系统不适应 HPLC的流出液体；强极性、难汽化和热不稳定的样品不适应质谱的常规进样和离子化方式。 LC-MS在发展的过程中曾出现了很多接口技术 ,现在在线联用接口汇集成商品化的5种接口为传送带(MB)、流动快原子轰击(CFFAB)、粒子束(PB)、热喷雾(TSP)以及大气压电离(API) 。其中API技术尽管不能全部代替其他4种接口 ,但它的出现使HPLC方法可以对强极性、高熔点、低挥发性和热不稳定性样品进行分析 ,因此逐渐受到法庭科学工作者的青睐。API技术分为电喷雾电离(ESI) 、大气压化学电离 (APCI),目前商业化的LC-MS绝大多数使用这两种接口,下面简单介绍这两种接口的特点。;1. 电喷雾电离(ESI) ESI是高电压加在毛细管喷口上 ,通过电动喷雾 ,雾化的液滴经去溶剂化最终成为样品的准分子离子 ,电喷雾由此而得名。ESI有正离子化和负离子化两种模式可供选择 ,碱性样品一般选择正离子化模式 ,酸性样品一般选择负离子化模式。具有离子化效率高、灵敏度高、分析范围广等优点。它可以形成多电荷离子分析大分子如多肽、蛋白质等,也可形成单电荷离子分析较小分子量(1000amu)的极性化合物,如小分子药物及其代谢物 ,用于农药及化工产品的中间体和杂质的鉴定。; 2. 大气压化学电离(APCI) APCI是样品进入气相后依赖电晕放电发生离子化。被分析物随溶液一起通过不锈钢探针 ,同时被加热气化 ,其溶胶进入离子源,借助电晕放电而带电 ,随后分子、离子之间进行电荷转移(化学反应)使被反应物带电与GC-MS不同的是并不需要反应气。与ESI相比,所要求的液相