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色谱分离法;第一节 概述;; 在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相； 自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相； 装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱 。 ;第一节 概述 色谱分离（Chromatographic Resolution，CR）利用多组分混合物中各组分物理化学性质（如吸附力、分子极性、分子形状和大小、分子亲合力、分配系数等）的差别，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相中。当多组分混合物随流动相流动时，由于各组分物理化学性质的差别，而以不同的速率移动，使之分离。;1. 按分离机理不同分类;吸附色谱分离是指混合物随流动相通过固定相（吸附剂）时，由于固定相对不同物质的吸附力不同而使混合物分离的方法。;无机吸附剂在有机大分子色层分离中的实用例子——丝裂霉素的精制。;分配色谱是利用混合物中各物质在两液相中的分配系数不同而分离。;离子交换色谱是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，由于混合物中不同溶质对交换剂具有不同的亲合力而将它们分离。;碱性水溶性抗生素的分离和分析也常用离子交换色层分离法。;凝胶色谱以凝胶为固定相，是一种根据各物质分子大小不同而进行分离的色谱技术，又称为分子筛色谱（Molecular Sieve Chromatography，MSC）、空间排阻色谱或尺寸排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）。;应用举例;生物体中许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性，如酶蛋白与辅酶、抗原和抗体、激素与其受体、核糖核酸与其互补的脱氧核糖核酸等体系，把与目的产物具有特异亲合力的生物分子固定化后作为固定相，当含有目的产物的混合物（流动相）流经此固定相时，即可把目的产物从混合物中分离出来。;酶;柱色谱，具有进样量大，回收容易等优点，但其分辨率不如纸上色谱和薄层色谱高； 纸上色谱，以滤纸为载体，是以滤纸纤维及其结合水作为固定相，以有机溶剂作为流动相的分配色谱分离。纸上色谱分离具有设备简单、操作方便、分离效率高、所需样品量少等优点，但分离量少、回收困难，分离速度慢等； 薄层色谱分离 ，将固定相在玻璃平板上铺成薄层而进行分离的一种分离技术。薄层色谱是柱色谱和纸上色谱两者的结合。;3.按照展开程序分类 按照展开程序的不同，可将色谱法分为洗脱法、顶替法和迎头法。 ;洗脱法也称冲洗法。工作时，首先将样品加到色谱柱头上，然后用吸附或溶解能力比试样组分弱得多的气体或液体作冲洗剂。由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力不同，被冲洗剂带出的先后次序也不同，从而使组分彼此分离。流出曲线下图。 ; 这种方法能使样品的各组分获得良好的分离，色谱峰清晰。此外，除去冲洗剂后，可获得纯度较高的物质。目前，这种方法是色谱法中最常用的一种方法。;; 此法适于制备纯物质或浓缩分离某一组分；其缺点是经一次使用后，柱子就被样品或顶替剂饱和，必须更换柱子或除去被柱子吸附的物质后，才能再使用。 ;炉酮瞩炭拯在槛少洼酒乃纪霜砚现八焊宁旷舟府弗铭导妮筛瘦肌夜礼病琶下游技术 色谱分离10下游技术 色谱分离10;篆统躬峰珊皆或就锹筹弟柬容硷郧谈瑚绒馏样厉废娩播奎妮麻撩仰谱下械下游技术 色谱分离10下游技术 色谱分离10;第三节. 生物工程中色谱分离;（二）色谱分离方法的选择;对于蛋白质、酶、核酸等生物大分子，由于它们分子量大、易失活以及具有生物专一和亲合性等特点，选用多糖基质（如纤维素、葡聚糖、琼脂糖等）离子交换色谱、疏水作用色谱、凝胶色谱和亲合色谱等； 对于生物小分子的代谢物，由于它们分子量小、结构和性质比较稳定、操作条件不太苛刻，采用吸附、分配和离子交换色谱进行分离较为适宜。;第四节. 色谱分离的基本原理;;键效酮喧泵鸦渡抄秒源庶豁蹄雏字摔犯祭酥滤禾相磅精杉淡峨防恕荆帮秩下游技术 色谱分离10下游技术 色谱分离10;（一）分配色谱; 分配系数是由组分和固定相的热力学性质决定的，它是每一个溶质的特征值，它仅与两个变量有关：固定相和温度。与两相体积、柱管的特性以及所使用的仪器无关。 ;阻滞因子是在色谱系统中溶质的移动速度和标准物（与固定相没有亲和力的流动相 Kd=0）的迁移率之比 ;; k值越大，说明组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大，因此又称分配容量或容量因子。它是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数。k值也决定于组分及固定相热力学性质。它不仅随柱温、柱压变化而变化，而且还与流动相及固定相的体积有关。 k = ms/mm =CsVS/CmVm 式中cs,cm分别为组分在固定相和流动相的浓度；Vm为柱中流动相的体积，近似等于