《基因治疗》ppt课件.ppt

2013-11; 高基民于86年和89年毕业于第一军医大学获学士和硕士学位、94年毕业于第四军医大学获博士学位，海外留学10年（1995.1-2005.3，加拿大1年，美国9年）。现为钱江特聘教授、博士生导师，教育部检验医学省部共建重点实验室免疫学方向负责人、浙江省模式生物技术与应用重点实验室主任、国家精品课程《免疫学与免疫学检验》主持人、浙江省高等学校教学名师、浙江省高校第三批中青年学科带头人、录选第二批浙江省卫生高层次创新人才培养工程、温州医学院科技处处长。曾获国家II类新药证书一个，军队科技进步二等奖、广东省科技进步二等奖各一项；发表学术论文50余篇，其中SCI收录38篇；申请发明专利14项，其中已授权2项。研究方向主要为肿瘤的免疫学诊断与治疗。近5年，承担国家、省部科研课题12项，获科研经费1000余万元。 jimingao64@163.com;/wiki/Gene_therapy;狭义概念 将具有正常功能的基因置换或增补患者体内有缺陷的基因，从而达到治疗疾病的目的。;1. 分子缺陷清楚 2. 可以得到相应基因的克隆 3. 病理生理机制已知 4. 有利的风险-利益比 5. 治疗基因可以被调控 6. 合适的靶细胞 7. 有效安全 8. 相关法规健全;（1）基因矫正（gene correction） 对于致病基因中的异常碱基进行精确修复，使其恢复正常功能； （2）基因置换（gene replacement） 用正常基因在原位替换致病基因，使细胞DNA完全恢复正常状态； （3）基因增补（gene augmentation） 将正常基因导入患者体细胞内，使其整合到染色体中一起表达，以补偿缺陷基因的功能 ，但致病基因未去除； （4）基因表达调节（modulation ） 指将特定的反义核酸、RNA干扰或核酶等技术抑制目的基因表达从而消除致病基因的作用。;第一节 基因治疗的概念及其策略二、基因治疗的总体策略;第一节 基因治疗的概念及其策略二、基因治疗的总体策略; 第二节 基因治疗的基本程序; 第二节 基因治疗的基本程序;在了解疾病发生的分子机制基础上，选择对疾病有治疗作用的 特定基因。如对单基因缺陷遗传病，可用野生型（非突变）基 因即可用于治疗； 对于肿瘤，最好选择???些与该类肿瘤密切相关的癌基因或抑癌 基因用于基因治疗。 治疗性基因获得的方法很多： 用酶切或探针杂交法从基因组DNA文库获得，从cDNA文库获取， PCR扩增，人工合成等。;基因治疗关键步骤之一，是将治疗基因高效转移入患者体内、并能调控其适度表达。 常用的载体有两类：病毒载体和非病毒载体。 病毒载体：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、慢病毒载体、疱疹病毒载体等 非病毒载体：裸露DNA、脂质体、分子耦联载体、染色 体载体、多聚物、纳米载体等。 ： 与病毒载体的主要区别在于：采用理化方法将治疗基因转移入患者体内。;第二节 基因治疗的基本程序二、基因的转运;第二节 基因治疗的基本程序二、基因的转运（逆转录病毒载体）;逆转录病毒载体的特点 （1）结构和感染过程与普通逆转录病毒相似； （2）可使靶细胞变成稳定表达目的基因的转化细胞； （3）感染靶细胞后不扩散； （4）假病毒感染靶细胞的效率非常高； （5）不感染非增殖细胞。;同时也存在一定的缺点: ①容量小，只能容纳8kb-10kb的外源基因片段； ②血清补体能使之失活； ③病毒滴度低，低于治疗大肿瘤需要的滴度； ④病毒整合到DNA后，可能引起插入突变和激活癌基因的可能； ⑤宿主范围有限，只感染增殖细胞，故在应用 上有一定局限性。;慢病毒(HIV)载体 Lentivirus ;祭丛嘎氦驮双梦参虾持庐烯圈辆淳杭诧卤杰衣端授固通筒严钻貌泞债扎郧基因治疗基因治疗; 腺病毒载体 1、结构;2、腺病毒载体特点 （1）宿主范围广 （2）腺病毒蛋白表达不以宿主增殖为必要条件 （3）可获得高病毒效价 （4）重组体非常稳定 （5）不会引起肿瘤 （6）有较高的安全性 （7）无包膜，不易被补体灭活，可直接在体内应用 （8）不整合入染色体;斥删篡袁消衙时玫骤抢愤嫩普学湃瞩肮颇卵阅模峰躺坛菱词潜仙发驼橡锹基因治疗基因治疗;柞角全问页寻瞄迎衍绅家拣庐肥温寝另完辰蔷者桥杰杖第摊告蓖上仗站讼基因治疗基因治疗;痘苗病毒载体 ;腺病毒表达系统与慢病毒表达系统的比较;单纯疱疹病毒载体;脂质体 ;分子耦联载体 ;多聚物载体是利用带正电荷的多聚阳离子与带负电荷的DNA相结合，形成稳定的多聚复合物，使DNA不易被核酸酶降解，并可与细胞表面带负电荷的受体相结合，而被摄入到细胞中。 ;裸露质粒DNA ;染色体载