水溶C100中还原型抗坏血酸的测定----6-二氯酚靛酚滴定法.pptVIP

水溶C100中还原型抗坏血酸的测定 ----2, 6-二氯酚靛酚滴定法 回顾 维生素定义；特点；分类 维生素C；存在形式；理化性质；生理功能 维生素C缺乏症；每日摄入量；来源 维生素C的营养状况评价 一、目的 了解营养评价中实验室检查的意义 掌握食物中还原型VitC测定方法 掌握如何对食物中还原型VitC的含量进行分析及评价 二、原理及步骤 步骤 用标准维生素C溶液标定2, 6-二氯酚靛酚染料； 用标定后的2, 6-二氯酚靛酚染料滴定样品，测得其还原型维生素C的浓度。 操作步骤 0.1%抗坏血酸标准储备液（1mg/ml），冰箱保存待用（已配制）。 1%草酸溶液：1g草酸充分溶解后→洗入100ml量筒中，加蒸馏水至100ml刻度，搅匀→备用（已配制） 。 配制抗坏血酸标准应用液：用移液管取1ml 0.1%抗坏血酸标准储备液于50ml容量瓶，加1%草酸至刻度，摇匀，留用。（1mg/50ml） 空白试验：在三角烧瓶中加入10ml 1%草酸，用2,6-二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录结果Cml。（两次） 标定二氯酚靛酚染料：在三角烧瓶中加入5ml抗坏血酸应用液、5ml 1%草酸，混匀，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录所用染料Aml。 操作流程 水溶C100稀释液制备：市售水溶C100饮料冰箱待用。使用前用草酸溶液稀释10倍（已制备）。 水溶C100稀释液中抗坏血酸浓度测定：在三角烧瓶中加入5ml水溶C100稀释液、5ml 1%草酸，混匀，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录结果B ml。（两次） 操作流程 注意事项 由于抗坏血酸在许多条件下都容易被氧化，因此，测定过程要迅速，并且应避免接触铜、铁等金属，一般不超过2min 。 样品中可能有其他杂质也能还原2, 6-二氯酚靛酚，但还原速度比还原型维生素C慢，故滴定时以15s内粉红色不褪去为止； 维生素C标准品溶液：短期、棕色瓶、冷藏； 滴定终点的判断 结果分析与讨论 配制抗坏血酸应用液：用移液管取1ml 0.1%抗坏血酸标准母液于50ml容量瓶，加1%草酸至刻度，摇匀，留用。 空白试验：在三角烧瓶中加入10ml 1%草酸，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录结果C(ml)。（两次） 标定二氯酚靛酚染料：在三角烧瓶中加入5ml抗坏血酸应用液、5ml 1%草酸，混匀，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录所用染料A(ml)。 1ml 二氯酚靛酚相当于抗坏血酸Tmg，T=0.1/（A－C）。(两次) 水溶C100稀释液中抗坏血酸浓度测定：在三角烧瓶中加入5ml柠檬汁稀释液、5ml 1%草酸，混匀，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录结果(Bml)。(两次) 还原型抗坏血酸能还原染料2, 6-二氯酚靛酚，自身氧化为脱氢型，在酸性溶液中， 2, 6-二氯酚靛酚显示红色，还原后变为无色。 维生素C全部被氧化时，滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液由无色变为微红色时表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。 * * 抗坏血酸含有-OH基，具有较强的还原性，能还原染料2,6-二氯酚靛酚。 该染料在酸性溶液中呈红色，被还原后为无色。 在没有杂质干扰时，一定量的食物溶液还原标准染料的量与其中的抗坏血酸成正比。 蓝色 红色 无色 2, 6-二氯酚靛酚染料的标定 2, 6-二氯酚靛酚染液 A: 标准维生素C溶液(5ml)+草酸（5ml，1%） 滴定 无色变为淡红色 15s内不褪色 C: 空白组为草酸（10ml，1%） 1ml染料相当于还原型维生素C的mg T (mg/ml) = 0.1 A-C（ml） 样品中还原型维生素C的浓度的测定 (采用标定的2, 6-二氯酚靛酚染料滴定) 2, 6-二氯酚靛酚染液 B: 稀释后的样品（5ml）+草酸（5ml，1%） 滴定 无色变为淡红色 15s内不褪色 样品中还原型维生素C浓度 C样（mg/L）= （B － C）× T 5 ml × 10 × 1000 C样（mg/L）= （B － C）× T 5 ml × 10 × 1000 *