抗体纯化及纯 度的检测课件20121127课件.pptVIP

抗体纯化及纯度的检测;抗体纯化的方法;③超滤法—利用孔径大小不同的特制薄膜对不同分子大小的抗原物质进行滤筛。 ④层析法— 凝胶过滤、离子交换、亲和层析 IgA相对分子量160,000，IgM相对分子量1000,000，故可通过分子筛将两者分开而得到纯品。 ⑤电泳— SDS ; 一、硫铵盐析法 简便、蛋白质变性较少，33%饱和度的硫铵可以沉淀所有各类免疫球蛋白；缺点是分离的纯度较差，对IgA类抗体来说，浓盐可使其形成二聚体，不宜采用。 ;;;;操作步骤 将硫酸铵晶体在乳钵中研磨成粉末状； 将盛有5ml蛋白质溶液（血液或消化液）的烧杯放在另一装有冰水的溶器内，并置于磁力搅拌器上搅拌； 加5mL生理盐水，边搅拌，边徐徐加入1.06g硫酸铵粉末至20%饱和； 在4℃放置1h后，用8000g离心20min； 取上清液转入另一烧杯，放在冰水的溶器内，在磁力搅拌器上边温和搅拌，边加入3.84g硫酸铵粉末至80%饱和； 4℃放置2h后，用8000g离心20min； 弃去上清液，取0.5 mL 生理盐水溶解沉淀； 装入透析袋，用0.0175mol/L PBS（pH 7.4）透析1d，期间换透析液6次。;二、Cohn冷酒精沉淀法：;凝胶过滤 ( 分子筛) 层析;离子交换层析法 ;四、硫铵盐析和DEAE-纤维素柱层析法纯化IgG 在pH7.5的溶液中IgG带正电，其他血清蛋