抗体制药ppt课件第三章_1.pptVIP

1、鉴定与检测方法的要求 应快速、灵敏、特异性（专一性）强、微量、简便并一次能检测大批标本。 2、常用的检测方法有 ①、抗原直接结合法：适用于检测能与可溶性和颗粒抗原特异结合的抗体。 ②利用第二抗体检测的方法：适用于检测能与可溶性和颗粒抗原特异结合的抗体。 有酶联免疫法，放射免疫法，免疫电镜技术，免疫荧光技术。 （1）抗原直接结合法 ①选取相应的纯一抗原，用125I进行标记，然后和杂交瘤细胞培养的上清液混合，在一定温度下反应一定时间（如4℃，1h等） ②再通过活性炭吸附、PEG 6000沉淀或凝胶层析的方法分离未结合的抗原，纯化抗体抗原免疫复合物。 ③最后通过测定其复合物的放射性强弱来进行定性和定量测定。 （2）利用第二抗体检测 第二抗体：能与抗原和抗体发生免疫反应后形成的复合物进行特异结合的抗体，又称抗抗体 应用第二抗体检测杂交瘤分泌的抗体时，需采用免疫标记技术。将第二抗体用125 I放射性同位素标记，或与酶连接，或与荧光染料连接，或用电子致密物质加以标记，以提高检测的准确性和灵敏度。 具有应用范围广，反应速度快，容易观察，且能进行定量和定性检测的特点。 ①免疫荧光技术 是利用结合有荧光素的第二抗体与抗原抗体的免疫复合物特异性结合，再检测荧光强度实现定性定量检测的技术。 常用的荧光素有异氰基荧光素（FIC）、异硫氰基荧光素等。 基本原理：荧光素可与第