大肠杆菌感受态细的制备及转化.docVIP

大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 作者：孙群 来源：上海交大生命学院 时间：2008-5-18 [实验原理]（供参考，试剂盒的Solution SS成分未知）细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是：在0下的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞膨胀成球形。转化缓冲液中的DNA形成不易被DNA酶所降解的羟基—钙磷酸复合物，此复合物粘附于细菌细胞表面。42短时间热处理（热休克），可以促进细胞吸收DNA复合物。将处理后的细菌放置在非选择性培养液中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型(如Amp抗性) 得到表达。然后再涂布于含有氨苄青霉素的选择性平板上，37培养过夜，这样即可得到转化菌落。?[仪器、材料与试剂](一)仪器??? 1．小型高速离心机??? 2．恒温摇床??? 3．恒温箱??? 4．-20冰箱??? 5．恒温水浴器(二)材料??? 1．氨苄青霉素??? 2．大肠杆菌DH5a??? 3．pUC19??? 4．1.5mL 离心管??? 5．枪头、枪??? 6．试管、培养皿(三)试剂??? 1．快速感受态细菌制备试剂盒（申能博彩公司产品）??? 2．LB培养液?????? 在950mL去离子水中加入：?????? 胰蛋白胨 (tryptone)??????????????