1.2.1 微生物的实验室培养.pptVIP

1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 第一次灼烧（操作第一步）：为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。 每次划线前灼烧：杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 划线结束灼烧：及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 2. 稀释涂布法 稀释涂布法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： 菌液 涂布平板操作 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。 例如：酒精灯与培养皿的距离要合适、 吸管头不要接触任何其他物体、 吸管要在酒精灯火焰周围等等。 3．平板划线法和稀释涂布平板法的比较 优点 缺点 适用范围 平板划线 法 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 不能计数 适用于好氧菌 稀释涂布 平板法 可以计数，可以观察菌落特征 吸收量较少、较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延 适用于厌氧菌和兼性厌氧菌 培养： 将接种后的培养基和一个未接种的培养基 放入37℃恒温箱中培养12h～24h后， 观察并记录 五、菌种的保存 1. 临时保藏法 对象： 温度： 缺点： 2. 甘油管藏法： 对象： 温度： 频繁使用的菌种 4℃（冰箱） 容易被污染或产生变异 长期保存的菌种 -20℃（冷冻箱） 1ml甘油（灭菌）＋1ml菌液 搁置斜面 六、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格 （二）接种操作是否符合无菌要求 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 如果未接种的培养基在恒温箱中保温后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同 微生物的培养 基础 知识 实验操作 结果分析与评价 培养基 定义： 分类： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养物质 无菌技术 培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法 定义： 消毒与灭菌 常用的消毒和灭菌方法 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 纯化大肠杆菌 课堂小结 课题1 微生物的实验室培养 1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构，且体内一般不含有叶绿素，不能进行光合作用. 2.微生物包括五类 病 毒 细 菌 放线菌 真 菌 原生动物 无细胞结构 真核细胞 原核细胞 一、微生物: 二、培养基 1. 概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2. 基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 牛肉膏、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源 无机氮源： 有机氮源： NH4＋、NO3-（为硝化细菌提供N源和能源） 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等 注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 2. 特殊营养： 维生素、碱基等（生长因子） （牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有） 3. pH、氧气的需求 霉菌-酸性 细菌——中性或微碱性 4. 种类： 按照培养基的成分来分： (1)合成培养基---成分明确；用于分类、鉴定 (2)天然培养基---成分不明确，用于工业生产 (3)半合成培养基按照培养基的物理状态分： (1)固体培养基---用于微生物分离、鉴定和活菌计数 (2)液体培养基---用于工业生产 (3)半固体培养基---用于观