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中和确认实验对HBsAg弱反应性结果的确认及应用评价 南充市中心医院检验科 目的：应用中和确认试验对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱反应性样本的结果进行确认。 方法：采用电化学发光免疫分析技术(ECLIA)检测乙型肝炎表面抗原，对从中筛选的26例弱反应性样本进行中和确认实验，并对结果进行分析评价。 结果：26例弱反应性标本中，经确认阳性的有22例（84.6%）,阴性2例（7.7%）,不确定2例（7.7%）。 结论：对于HBsAg弱反应性标本，应用中和确认实验确认。 许多实验室采用时间分辨免疫荧光法（TRFIA）和电化学发光法（ECLIA）代替传统的ELISA法，其检测的灵敏度特异性都有了显著提高，有效避免了乙型肝炎病毒感染的漏检，和输血、器官移植中的安全隐患，以及由此引起的医患纠纷。但检测灵敏度提高的同时，弱反应性阳性标本中是否存在假阳性？为此我们采用HBsAg确认试验，对弱反应性标本进行中和确认实验。 实验原理 该实验是根据特异性抗体的中和原理进行。由于polyclonal HBsAg特异性抗体附着在乙肝病毒表面抗原的优势免疫表位，从而阻塞了Elecsys HBsAg检测中所使用的抗体结合部位。确认试剂中过量的抗HBs抗体中和了该样本中所有HBsAg，在之后的Elecsys HBsAg检测中，与初测值相比降低了COI值。（样本信号/cutoff) 弱反应性的标本的处理 经E170 HBsAg检测中的弱反应性的标本，用证实试剂和对照试剂按如下方式平行处理：表 1 COI7标本的处理 确认组 对照组 确认试剂 180ul / 对照试剂 / 180ul 样本 20ul 20ul 表2 7=COI=30的标本的处理 确认组 对照组 确认试剂 100ul / 对照试剂 / 100ul 样本 100ul 100ul 表3 COI30的标本的处理 确认组 对照组 确认试剂 100ul / 对照试剂 / 100ul 1:20稀释 样本 100ul 100ul 表4 precicontrol HBsAg2标本的处理 确认组 对照组 确认试剂 20ul / 对照试剂 / 20ul precicontrol HBsAg2 180ul 180ul 充分混匀以上经处理的反应物，然后置2-8度温育过夜。证实试剂中过量的抗HBsAg抗体中和标本中的HBsAg。在随后进行的Elecsys HBsAg实验中，标本的cut-off指数(COI)将比原值降低。 表5 实验结果的判定 判定条件 结果 标本与证实试剂反应的COI/标本与对照试剂反应的COI50% 确认阳性 标本与证实试剂反应的COI/标本与对照试剂反应的COI50% 确认阴性 标本与对照试剂反应的COI1.0 不确定 实验结果如下 表6 COI 例数 确认阳性 确认阴性 不确定 1--1.1 2 0 0 2 1.1--7 9 9 0 0 7--30 11 10 1 0 30 4 3 1 0 合计 26 22 2 2 讨论 本次实验，26例弱反应性样本中有2例判断为不确定，占7.7%，分析未被确认的原因认为是COI值太低（均1.1）,因阳性值过低，在预处理过程中，被对照试剂稀释，而使得标本与对照试剂反应后COI1,无法判定确认结果。26例弱反应性标本有24例得到了确认，达92.3%，22例为确认阳性，2例为确认阴性。 有报道称HBV感染者中存在一部分隐匿性乙型肝炎感染的情况，即HBV持续存在，肝内可检出病毒，但血清中不能检出HBsAg，病毒HBVDNA低水平或阴性产生HBsAg弱阳性的现象可能是患者免疫功能受损后，机体与HBV或其产物产生新的平衡反应，一般情况下不具有严重致命性，但部分滴度低的HBsAg阳性者仍存在HBV复制，因此在机体免疫功能受损时可导致肝脏病情加重，甚至癌变。 本次试验弱反应性标本出现了不确定和假阳性，因此使用Elecsys检测HBsAg出现弱反应性的情况下，在条件成熟时，应进行确认实验，由此可以保证阳性结果的真实性。 谢谢大家！ * *